Extraction of THC and its Metabolites from Human Hair Using ISOLUTE® SLE+ Prior to UPLC-MS/MS Analysis

Význam tématu

Analýza lidských vlasů na THC a jeho metabolity přináší retrospektivní přehled expozice kanabinoidům v forenzní a klinické praxi. Metoda založená na podporované extrakci zlepšuje čistotu vzorku, snižuje riziko emulzí a zkracuje dobu přípravy.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout robustní postup pro extrakci THC, jeho karboxylovaného a hydroxy metabolitu, kyseliny THCAA, CBD a CBN z lidských vlasů pomocí ISOLUTE SLE+ a analyzovat je UPLC-MS/MS. Metodika byla optimalizována v manuálním režimu i automatizovaně na platformě Extrahera™.

Použitá metodika

Vzorek vlasů (20 mg) se homogenizoval v methanolu pomocí Biotage Lysera® se 4 kovovými kuličkami. Po centrifugaci se 200 µl supernatantu odpařilo a rekonstituovalo se 200 µl vody/methanolu (30:70). Extrakce podporovanou kapalinovou extrakcí probíhala na sloupcích nebo deskách ISOLUTE SLE+ 400 µl, kde se vzorek naložil a analyty eluovaly dvěma 600 µl porcemi MTBE. Výsledné extrakty se opět odpařily a rekonstituovaly před injekcí do UPLC-MS/MS.

Použitá instrumentace

• Biotage Lysera® pro micropulverizaci
• ISOLUTE SLE+ 400 µl kolony (820-0055-B) a 96-well desky (820-0400-P01)
• Biotage PRESSURE+ 48/96 pozitivní tlakové manifoldy
• Automatizační platforma Biotage Extrahera™
• TurboVap LV a Biotage SPE Dry 96 pro odpařování
• UHPLC Shimadzu Nexera X2 s kolonkou ACE Excel 2 C18
• MS Shimadzu 8060 Triple Quadrupole s ESI

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda poskytuje průměrné návratnosti analytů nad 75 % (desky) a nad 60 % (sloupce) s RSD <10 %. LLOQ dosahuje 0,2 pg/mg (THC-COOH) až 10 pg/mg (ostatní). Kalibrační křivky pro rozsah 0,1–200 pg/mg vykazují lineárnost r2 >0,99. Výsledky manuální a automatizované extrakce byly srovnatelné.

Přínosy a praktické využití metody

Postup kombinuje vysokou citlivost s efektivní přípravou vzorku, minimalizuje emulze i chemické interferenty. Hodí se pro rutinní forenzní, dopingovou a toxikologickou analýzu s možností vysokého průtoku.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření automatizace, miniaturizace matric a rozšíření na jiné drogové skupiny. Kombinace s vysoce citlivými MS systémy umožní sledovat i ultranízké hladiny.

Závěr

Navržená metoda s ISOLUTE SLE+ a UPLC-MS/MS je robustní, reprodukovatelná a vysoce citlivá, vhodná pro široké spektrum aplikací v analytické toxikologii.

Reference

Biotage Application Note AN919, 2019.