Analysis of Temozolomide

Význam tématu

Temozolomid je klíčové cytotoxické činidlo využívané především v léčbě glioblastomu a dalších nádorů centrálního nervového systému. Přesná kvantifikace této látky ve farmaceutických přípravcích a biologických matricích je zásadní pro zajištění kvality, účinnosti a bezpečnosti léčby.

Cíle a přehled studie

Cílem popsané aplikace bylo vyvinout a validovat jednoduchou, reprodukovatelnou a citlivou isokratickou RP-HPLC metodu pro stanovení temozolomidu a jeho případné příbuzné sloučeniny. Studie demonstruje oddělení a detekci hlavní látky i nečistoty na kolóně Shim-pack VP-ODS za použití UV detekce při 270 nm.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda je založena na reverzní chromatografii s isokratickou mobilní fází připravenou z methanolu a vody obsahující 0,5 % octové kyseliny a 0,094 % sodium hexanesulfonátu. Pro separaci temozolomidu a vedlejšího analytu byla optimalizována doba zadržení hlavní špičky na přibližně 9,5 minuty. Detekce je realizována UV spektrometricky při vlnové délce 270 nm.

Použitá instrumentace

• HPLC systém: Shimadzu i-Series LC-2050
• Kolona: Shim-pack VP-ODS, 150 × 4,6 mm, 5 µm
• Mobilní fáze: 4 % methanol v 96 % vodném roztoku s 0,5 % octové kyseliny a 0,094 % sodium hexanesulfonátu
• Průtok: 1,2 mL/min (nastaveno pro zadržení temozolomidu ≈ 9,5 min)
• Teplota kolony: 25 °C
• Objem injekce: 10 µL
• Detektor: UV/Vis při 270 nm

Hlavní výsledky a diskuse

Chromatogram aplikace ukázal dobrou rozlišitelnost mezi hlavní špičkou temozolomidu (retence ≈ 9,5 min) a špičkou příbuzné látky. Špičky byly úzké a symetrické, s dostatečným rozlišením (>2) pro spolehlivou kvantifikaci. Metoda vykázala konzistentní opakovatelnost zadržení i plochy špičky, což svědčí o její robustnosti.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a jednoduchá příprava mobilní fáze i vzorku.
• Minimální spotřeba organického rozpouštědla.
• Vysoká reprodukovatelnost a robustnost vhodná pro rutinní QC analýzy.
• Možnost simultánního sledování příbuzných nečistot.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření aplikace na vysoce výkonnou kapalinovou chromatografii (UHPLC) pro zkrácení doby analýzy. Další rozvoj může směřovat k LC–MS/MS detekci pro vyšší selektivitu a citlivost ve sledování metabolitů a stopových nečistot. Dále je perspektivní využití ekologičtějších mobilních fází a miniaturizovaných kolón.

Závěr

Vyvinutá RP-HPLC metoda poskytuje spolehlivý, citlivý a reprodukovatelný postup pro kvantifikaci temozolomidu a jeho příbuzné sloučeniny. Díky jednoduché přípravě a robustním výsledkům je vhodná pro rutinní kontrolu kvality farmaceutických produktů.

Reference

• Shimadzu Corporation. Application News 01-00120 (JP), první vydání, prosinec 2021.