Analysis of Adrenal Steroids in Dried Blood Spots and Serum Using Agilent Ultivo LC/TQ

Význam tématu

Analýza adrenálních steroidů hraje klíčovou roli v diagnostice a sledování endokrinních poruch, jako je kongenitální adrenální hyperplazie, Cushingův syndrom či hyperandrogenemické stavy. Možnost kvantifikace profilů steroidů z různých biologických matric (sušené krevní skvrny, sérum) umožňuje klinickým výzkumníkům zefektivnit screening, minimalizovat objem vzorku a urychlit výsledky v rutinní a výzkumné praxi.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo přenést stávající LC–MS/MS metodu pro stanovení 11 adrenálních steroidů ze sušených krevních skvrn a séra na platformu Agilent Ultivo LC/TQ. Studie hodnotila limity detekce a kvantifikace, reprodukovatelnost (intra- i interdenní variabilitu) a přesnost měření (recovery), a porovnávala výkonnost převedené metody s referenčním řešením.

Použitá metodika

Extrahované matrix:

• Sušené krevní skvrny: 2×4,7 mm punchky
• Serum: 15,2 µL

Pro extrakci se použilo 50/50 acetonu a acetonitrilu s interními standardy, inkubace 50 min (skrvny) nebo 20 min (serum), následné sušení N₂ a rekonstituce v 50 % metanolu s formiátovou kyselinou. Analýza probíhala v dynamickém MRM režimu, doba stanovení 6 min.

Použitá instrumentace

• LC systém: Agilent Infinity II 1290 (pumpa G7120A, autosampler G7167B, termostat kolony G7116B)
• Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1×50 mm, 1.7 µm, 23 °C
• Mass spectrometer: Agilent Ultivo Triple Quadrupole s JetStream ionizačním zdrojem (G6465A), pozitivní i negativní režim

Hlavní výsledky a diskuse

Stanovené meze detekce (LOD) a kvantifikace (LOQ) se pohybovaly v rozmezí nM:

• Sušená krev: LOD 0,05–0,95 nM, LOQ 0,18–3,16 nM
• Serum: LOD 0,11–1,25 nM, LOQ 0,28–4,15 nM

Recovery z sušené krve dosahovala 83–113 %, ze séra 57–78 %. Intraday variabilita byla nižší než 13 % (sušená krev) a 11 % (serum), interday do 17 % (sušená krev) a 19 % (serum). Tyto parametry potvrzují robustnost a reprodukovatelnost metody.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlou (<7 min) a spolehlivou kvantifikaci širokého spektra adrenálních steroidů, minimalizuje množství potřebného vzorku a zrychluje laboratorní workflow. Je vhodná pro screening novorozenců, sledování pacientů s endokrinními poruchami i pro farmaceutický výzkum.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření panelu o další steroidní metabolity a konjugáty
• Automatizace přípravy vzorků pro vysokou propustnost (high-throughput)
• Integrace metodiky do metabolomických platforem a aplikace v personalizované medicíně
• Využití sušených krevních skvrn v terénních studiích k minimalizaci logistických nároků

Závěr

Převedená metoda na Agilent Ultivo LC/TQ prokázala srovnatelnou výkonnost s existujícími systémy. Rychlost, citlivost a reprodukovatelnost analýzy z ní činí spolehlivé řešení pro klinické výzkumné i rutinní laboratorní aplikace.

Reference

1. New M. I. Inborn Errors of Adrenal Steroidogenesis. Molecular and Cellular Endocrinology 2003, 211(1-2):75–83.
2. Biason-Lauber A. et al. Defects of Steroidogenesis. Journal of Endocrinological Investigation 2010, 33(10):756–766.
3. Vaduva P.; Bonnet F.; Bertherat J. Molecular Basis of Primary Aldosteronism and Adrenal Cushing Syndrome. Journal of the Endocrine Society 2020, 4(9):bvaa075.
4. Janzen N. et al. Fast and Direct Quantification of Adrenal Steroids by Tandem Mass Spectrometry in Serum and Dried Blood Spots. Journal of Chromatography B 2008, 861(1):117–122.
5. Kim B. et al. Dried Blood Spot Testing for Seven Steroids Using LC-MS/MS. Annals of Laboratory Medicine 2015, 35(6):578–585.
6. Janzen N. et al. Newborn Screening for Congenital Adrenal Hyperplasia: Additional Steroid Profile Using LC-MS/MS. J Clin Endocrinol Metab 2007, 92(7):2581–2589.
7. Janzen N. et al. Rapid Steroid Hormone Quantification for CAH in Dried Blood Spots Using UPLC-MS/MS. Steroids 2011, 76(13):1437–1442.