Detection of Chloramphenicol in Honey Using Automated Solid-Phase-Extraction and HPLC-MS/MS-Detection

Význam tématu

Chloramfenikol je zakázané antibiotikum s vysokou bakteristatickou aktivitou, jehož zbytky se opakovaně nacházejí v dovážených medech.
Jeho přítomnost představuje riziko pro zdraví spotřebitelů a porušuje legislativní limity stanovené EU.

Cíle a přehled studie

Cílem studie je porovnání manuální a plně automatizované přípravy vzorků medu pomocí SPE a následné stanovení chloramfenikolu metodou UHPLC-MS/MS.
Klíčové kroky zahrnují úpravu vzorku, čištění SPE, výměnu elučního činidla a analýzu na MS detektoru v módu MRM.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorku: 5 g medu ředěného vodou, extrakce ethylacetátem, centrifugace a odpaření pod dusíkem.
• Solid-phase extraction (SPE): srovnání manuálního protokolu a plně automatizovaného postupu na FREESTYLE SPE.
• Výměna elučního roztoku: odpaření eluátu a rozpuštění ve směsi voda/acetonitril (95:5, v/v).
• Analytika: UHPLC (EC 150/2 NUCLEODUR π2, 5 μm) spojená s QTRAP 5500 v módu MRM (ESI-).

Použitá instrumentace

• UHPLC systém Agilent 1290 Infinity II s detektorem QTRAP 5500 (AB Sciex).
• Automatický SPE robot FREESTYLE BASIC s modulem SPE (LCTech).
• Dusíkový koncentrátor a centrifuga Rotina 420R (Hettich).

Hlavní výsledky a diskuse

• Automatizovaná SPE dosáhla průměrné výtěžnosti chloramfenikolu 86,8 % (RSD < 5 %), manuál 74,6 %.
• Vnitřní standard (chloramfenikol-d5) zabezpečil přesnou kvantifikaci a reprodukovatelnost.
• MRM chromatogramy prokázaly jasné oddělení analytu od matricových interferencí.
• Lineární kalibrace v rozsahu 0,5–100 ng/mL umožnila nízké meze detekce.

Přínosy a praktické využití metody

• Automatizace SPE zvyšuje propustnost analýzy a uvolňuje laboratorní kapacity.
• Metoda splňuje legislativní požadavky EU pro kontrolu antibiotik v potravinách.
• Platforma FREESTYLE je modulární a lze ji přizpůsobit dalším analytům.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace online SPE s LC-MS/MS pro plně kontinuální monitorování vzorků.
• Rozšíření aplikace na další antibiotika a kontaminanty ve včelích produktech.
• Využití strojového učení pro automatizované zpracování a vyhodnocování dat.

Závěr

Automatizovaná extrakce pomocí SPE na systému FREESTYLE spojená s UHPLC-MS/MS nabízí spolehlivé a reprodukovatelné stanovení chloramfenikolu v medu. Metoda je vhodná pro rutinní kontrolu reziduí a přináší vyšší efektivitu než klasický manuální postup.

Reference

• Wollseifen H.R., Kretschmer T.: Detection of Chloramphenicol in Honey Using Automated Solid-Phase-Extraction and HPLC-MS/MS. Application Note AN0027, MACHEREY-NAGEL GmbH & Co. KG, January 2020.