NIACIN (VITAMIN B3) - HPLC Analysis via Photochemical Post-Column Derivatization

Význam tématu

Niacin neboli kyselina nikotinová (vitamin B3) je klíčovou složkou koenzymů NAD+ a NADP+, které se účastní metabolizmu bílkovin, tuků a sacharidů. Je chemicky stabilnější vůči teplu, světlu a kyslíku než jiné vitaminy skupiny B, což usnadňuje jeho analýzu a kvantifikaci v potravinách a doplňcích stravy.

Cíle a přehled článku

Cílem aplikace je popsat optimalizované stanovení niacinu podle normy EN 15652:2009 metodou HPLC s postkolonkovou fotochemickou derivatizací a fluorescenční detekcí. Studie se zaměřuje na tři různé postupy extrakce vzorků (acidická, enzymatická, acidicko-alkalická) a uvedení podmínek chromatografie i detekce.

Použitá metodika a instrumentace

Pro stanovení niacinu se vzorky podrobí jedné ze tří hydrolýz:

• Option A – acidická hydrolýza
• Option B – enzymatická hydrolýza
• Option C – kombinovaná acidicko-alkalická hydrolýza (převod nikotinamidu na kyselinu nikotinovou)

Chromatografické podmínky:

• Režim: izokratický
• Mobilní fáze: 0,035 mol/l KH2PO4 (bez organické složky)
• Kolona: Phenomenex Luna C18, 5 µm, 150×2,0 mm
• Teplota kolony: 30–40 °C
• Průtok: 1,0 ml/min
• Objem injekce: 20 µl
• Degazace eluční fáze: helium nebo vakuum

Postkolonková derivatizace:

• Fotochemický reaktor UVE (254 nm, objem 1 ml)

Detekce:

• Fluorescenční detektor
• Excitační vlnová délka: 322 nm
• Emisní vlnová délka: 380 nm
• Detekční článková cely odolná tlaku až do 7 bar

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizace podle normy EN 15652:2009 prokázala, že čirý vodný eluční systém vyžaduje vysoce selektivní C18 fázi. Postkolonková fotochemická derivatizace zabezpečí citlivou fluorescenční odezvu a umožňuje spolehlivou kvantifikaci niacinu v širokém rozsahu koncentrací. Porovnání extrakčních postupů ukázalo, že kombinovaná hydrolýza (option C) naprosto převádí nikotinamid na kyselinu nikotinovou, což zjednodušuje vyjádření výsledku.

Přínosy a praktické využití metody

Výsledná metodika nabízí:

• Vysokou citlivost a selektivitu stanovení niacinu v potravinách a farmaceutických přípravcích
• Možnost stanovit součet nikotinamidu a kyseliny nikotinové i čistou kyselinu nikotinovou podle zvolené hydrolýzy
• Jednoduché programování izokratické metody a snadnou reprodukovatelnost výsledků

Budoucí trendy a možnosti využití

Další směřování zahrnuje vývoj kompaktnějších fotochemických reaktorů s vyšší propustností a sníženou dobou derivatizace, integraci on-line vzorkovačů pro sériové analýzy a automatizaci zpracování dat pro rychlé QA/QC aplikace. Perspektivní je také kombinace s hmotnostní detekcí pro potvrzení identity analýzovaných vitaminů.

Závěr

Popisovaná metoda HPLC s fotochemickou postkolonkovou derivatizací poskytuje robustní a citlivý přístup k analýze niacinu v potravinářských a farmaceutických matricích. Díky optimalizovaným extrakčním postupům a jednoduché izokratické chromatografii je vhodná pro rutinní kontrolu kvality.

Reference

1. European Institute for Standardization: EN 15652:2009, Detection of Vitamin B3 (Niacin) with HPLC, 2009
2. Kantonales Laboratorium Thurgau, Switzerland: přímá poznámka ke studii