Aflatoxin - HPLC analysis and photochemical post column derivatization

Význam tématu

Aflatoxiny jsou vysoce toxické mykotoxiny produkované plísněmi rodu Aspergillus. Jejich silné karcinogenní účinky, zejména na játra, a častý výskyt v potravinách jako ořechy, koření či sušené plody zdůrazňují potřebu citlivé a spolehlivé analýzy. Regulace EU stanovuje přísné maximální limity pro různé potravinářské matice.

Cíle a přehled studie

Cílem studie je představit robustní metodu stanovení aflatoxinů B1, B2, G1 a G2 pomocí HPLC s fluorescenční detekcí a postkolonovou fotochemickou derivatizací. Metoda je navržena tak, aby dosahovala detekčních limitů v jednotkách ppt bez složitého sušení nebo koncentrace extraktů.

Použitá metodika a instrumentace

Příprava vzorku:

• Extrahování aflatoxinů z potravin organickými rozpouštědly (methanol, acetonitril).
• Čištění pomocí imunoafinitních sloupců (AflaCLEAN, Afla-OtaCLEAN).

Chromatografické podmínky:

• HPLC se stacionární fází C18 (150 x 4,6 mm) s prekolonou.
• Isokratický mobilní fáze voda/acetonitril/metanol (60/15/30, v/v/v).
• Teplota kolony 36 °C, průtok 1,2 mL/min.
• Objem injekce 10–100 µL.

Derivatizace:

• Fotochemický reaktor UVE (254 nm, objem 1 mL) mezi výstupem kolony a fluorescenčním detektorem.

Detekce:

• Fluorescenční detekce (excitace 365 nm, emise 460 nm).

Hlavní výsledky a diskuse

Fotochemická derivatizace výrazně zlepšuje fluorescenční signál aflatoxinů B1 a G1 až o 30×, což umožňuje dosáhnout detekčních limitů v nízkém ppt rozsahu. Chromatogramy prokazují vynikající separaci čtyř analytů s retencí přibližně 5,0 min (G2), 5,8 min (G1), 6,6 min (B2) a 7,7 min (B1). Metoda eliminuje nutnost koncentrace extraktu a zjednodušuje pracovní postup.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí rychlou a citlivou detekci aflatoxinů v různých potravinových matricích. Díky jednoduchému postkolonovému derivatizačnímu modulu UVE je možné provádět přímé měření bez chemických činidel. Předností je menší zatížení matice a vyšší laboratorní efektivita, využitelná v akreditovaných laboratořích pro zajištění kvality a bezpečnosti potravin.

Budoucí trendy a možnosti využití

Vzhledem k neustálému vývoji detektorské techniky a požadavku na vyšší automatizaci lze očekávat:

• Integraci fotochemické derivatizace do hyphenovaných systémů s HPLC-MS.
• Snížení objemu reaktorových smyček a úsporu rozpouštědel.
• Online čištění vzorků kombinované s imunoafinitními moduly.

Závěr

Popisovaná metoda HPLC s fotochemickou postkolonovou derivatizací nabízí rychlý, citlivý a robustní přístup k stanovení aflatoxinů v potravinách. Výsledky prokazují vysokou citlivost, dobrou reprodukovatelnost a snadnou implementaci v rutinní analýze.

Reference

1. A. Papadopoulou-Bouraoui, J. Stroka, E. Anklam, J. AOAC Intl. 85(2), 411–416, 2002.
2. V.S. Sobolev, J.W. Dorner, J. AOAC Intl. 85(3), 642–645, 2002.
3. AOAC Official Method 2005.08: Aflatoxins in Corn, Raw Peanuts, and Peanut Butter; LC with Post-Column Photochemical Derivatization.