Determination of Rosuvastatin in Human Plasma by SPE-LC-MS/MS using SOLA and Accucore RP-MS column

Význam tématu

Rosuvastatin je významný statin užívaný ke snižování hladiny cholesterolu a prevenci kardiovaskulárních onemocnění. Precizní stanovení jeho koncentrace v lidské plazmě je klíčové pro farmakokinetické studie, monitorování pacientů a kvalitu biomedicínských analýz. Citlivé a rychlé metody s minimální spotřebou vzorku a rozpouštědel zvyšují efektivitu a spolehlivost klinických i výzkumných laboratoří.

Cíle a přehled studie

Cílem této studie bylo vyvinout a validovat jednoduchý, rychlý a vysoce citlivý postup pro kvantifikaci rosuvastatinu v lidské plazmě. Metoda kombinuje extrakci na pevné fázi (SPE) s využitím SOLA 96-well destičky a chromatografii s vysokým rozlišením na Accucore RP-MS kolonce následovanou detekcí v režimu tandemové hmotnostní spektrometrie (LC-MS/MS).

Použitá metodika a instrumentace

Postup extrakce:

• Podmínění destičky SOLA methanolem a vodou.
• Naložení 100 µl plazmy a gravitační průnik matrice.
• Promytí 0,1 % kyseliny mravenčí a 10 % methanolem.
• Eluce rosuvastatinu 90 % methanolem, sušení za dusíku a rekonstituce v 1:4 (v/v) metanol-voda.

Chromatografie:

• Kolonka Accucore RP-MS (50×2,1 mm, 2,6 µm), mobilní fáze A: voda + 0,1 % kyseliny mravenčí, B: methanol + 0,1 % kyseliny mravenčí.
• Gradient: 5 % B až na 95 % B během 1 min, návrat na 5 % B v 1,62 min; průtok 0,75 ml/min, teplota 60 °C, doba běhu 3,6 min, objem injekce 15 µl.

Hmotnostní spektrometrie:

• TSQ Vantage, ionizace HESI v pozitivním módu, SRM přechody 482,30→258,15 pro rosuvastatin a 488,22→264,17 pro d6-IS.
• Optimalizované podmínky: spray napětí 3000 V, vaporizační teplota 475 °C, kapilární teplota 300 °C, kolizní tlak 1,5 mTorr.

Použitá instrumentace

• SPE hardware: SOLA 96-well destičky, pozitivní tlakový manifold, systém na odpařování vzorků.
• LC systém: Thermo Scientific Accela 600 pumpa, Accela Open Autosampler.
• MS detektor: Thermo Scientific TSQ Vantage triple quadrupole.
• Kolonka: Thermo Scientific Accucore RP-MS s Uniguard připojením.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala v rozsahu 1–1000 ng/ml lineární odezvu (r2 = 0,9984) při 1/x vážené regresi. Mezní dolní kvantifikovatelná koncentrace (LLOQ) 1 ng/ml vykázala přesnost a preciznost pod 6 %. Testy přesnosti a opakovatelnosti v úrovních 3, 400 a 750 ng/ml potvrdily relativní chybu < 11 % a RSD < 6 %. Obnova analyzované látky dosahovala 99,3 % s RSD 4,9 %. Matriční efekt byl zanedbatelný. Chromatogramy potvrdily vynikající tvar vrcholu a dostatečnou separaci od endogenních interferencí.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká citlivost a rychlost analýzy (3,6 min na vzorek).
• Minimalizovaná spotřeba vzorku (100 µl plazmy) a organických rozpouštědel.
• Vynikající reprodukovatelnost a absence matričních interferencí.
• Vhodné pro vysoce propustné bioanalytické a klinické laboratoře.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další miniaturizace a automatizace extrakčních postupů.
• Rozšíření SPE technologií se selektivními sorbenty pro různé třídy léků.
• Vývoj multiplexních metod pro současné stanovení několika statinů.
• Použití ultrarychlých kolonek s nižšími spotřebami mobilních fází.

Závěr

Vyvinutá metoda SPE-LC-MS/MS je robustní, rychlá a vysoce citlivá pro kvantifikaci rosuvastatinu v lidské plazmě. Splňuje požadavky bioanalytických standardů na linearitu, přesnost, opakovatelnost a selektivitu a je připravena pro rutinní nasazení v klinických i farmakokinetických aplikacích.

Reference

1. Pelat M., Dessy C., Massion P., Desager J.-P., Feron O., Balligand J.-L. J. Circ. 2003, 107, 2480.
2. Trivedi R.K., Kallem R.R., Mullangi R., Srinivas N.R. J. Pharm. Biomed. Anal. 2005, 39(3-4), 661–669.