Doxepin in Human Plasma Using SOLA and Accucore Core Enhanced Technology HPLC Column

Význam tématu

Stanovení doxepinu v lidské plazmě je klíčové pro monitorování terapeutických hladin antidepresiva a optimalizaci léčby. Rychlá a spolehlivá analýza ve složitých biologických matricích zajišťuje přesnost výsledků a podporuje farmakokinetické studie i klinické rozhodování.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout vysoce reprodukovatelnou a citlivou metodu pro kvantifikaci doxepinu v lidské plazmě pomocí kombinace SOLA SPE kazet a Accucore Core Enhanced HPLC kolony. Metoda měla splnit nároky na vysokou propustnost vzorků, nízkou spotřebu rozpouštědel a rychlou dobu analýzy.

Použitá metodika

Pro extrakci doxepinu a interního standardu protryptilinu byla použita SPE kazeta SOLA (10 mg/1 mL). Postup:

• Podmínění 1 mL methanolu, ekvilibrace 1 mL vody
• Naložení 200 µL plazmy se stanoveným interním standardem
• Promytí 1 mL směsí vody/methanolu (95:5) s 0,5 % amoniaku
• Eluce 0,2 mL methanolu obsahujícího 0,1 % kyseliny mravenčí
• Sušení při 40 °C dusíkem a rekonstituce do 200 µL vody/methanolu (80:20)

Chromatografická separace probíhala na koloni Accucore C18 (2,6 µm, 50×2,1 mm) s gradientem vody a acetonitrilu, oba s 0,1 % kyselinou mravenčí, při průtoku 0,4 mL/min a teplotě kolony 40 °C.

Použitá instrumentace

Analytický systém zahrnoval:

• Thermo Scientific HPLC systém s UV detekcí při 245 nm
• Kolona Accucore C18 2,6 µm (50×2,1 mm)
• Software Thermo Scientific ChromQuest ver. 5.0

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila separaci doxepinu a interního standardu během méně než 2 minut. Single-point kalibrace a pět replik vedly k průměrné obnově 113 % a relativní standardní odchylce 5,6 %. Gradientní proplach po 2,5 minutách obnovil kolonu pro další analýzu s nízkým objemem dead-volume zařízení.

Přínosy a praktické využití metody

Vyvinutá metoda přináší:

• Rychlou analýzu s krátkou dobou běhu pod 2 minuty
• Vysokou reprodukovatelnost extrakce v komplexních matricích
• Nižší spotřebu rozpouštědel díky efektivnímu SPE
• Zvýšenou citlivost a čistotu extraktů

Metoda je vhodná pro vysoce výkonné bioanalytické laboratoře, klinické studie a farmakokinetická měření.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může zahrnovat:

• Automatizaci SPE kroků pro vysokou průchodnost vzorků
• Implementaci tandemové hmotnostní spektrometrie pro multiplexní analýzu
• Optimalizaci gradientních programů pro širší škálu léčiv
• Integraci miniaturizovaných kolony pro rychlejší rekolektivaci

Závěr

Metoda využívající SOLA SPE a Accucore Core Enhanced HPLC kolonu pro stanovení doxepinu v lidské plazmě je rychlá, citlivá a reprodukovatelná. Poskytuje významné výhody ve výkonnosti, snížení spotřeby rozpouštědel i ve finančních nákladech, přičemž plně vyhovuje požadavkům bioanalytických aplikací.