Amlodipine in Human Plasma Using SOLA CX and Accucore RP-MS Column

Význam tématu

Rychlá a spolehlivá kvantifikace amlodipinu v lidské plasmě je klíčová pro farmakokinetické studie, monitorování léčivých dávek a hodnocení bezpečnosti při léčbě hypertenze a anginy. Optimalizace přípravy vzorku i chromatografické analýzy zvyšuje produktivitu laboratoří a přesnost výsledků.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace bylo vyvinout efektivní extrakční metodu amlodipinu ze vzorků lidské plazmy pomocí Thermo Scientific SOLA CX desek a dosáhnout krátkého chromatografického běhu na Accucore RP-MS column. Studie demonstruje reprodukovatelnost, čistotu extraktu a analytickou přesnost metody.

Použitá metodika

Sample handling a extrakce probíhaly ve 96-jamkových destičkách SOLA CX. Metoda zahrnovala:

• Kondicionování: 500 µl methanolu
• Equilibrační stupeň: 500 µl vodného roztoku s 2 % kyseliny formiové
• Naložení: 200 µl plazmy navíc s IS (nifedipin)
• Omytí: nejprve 200 µl vodné kyseliny formiové, poté 200 µl vodomethanol 70:30 s 2 % kyseliny formiové
• Eluce: 200 µl methanolu s 5 % amoniaku
• Sušení extraktu UltraVap a rekonstituce v 200 µl LC-MS methanolu

Použitá instrumentace

• Solid Phase Extraction: SOLA CX 96-well plate (10 mg, part no. 60309-002)
• HPLC systém: Thermo Scientific Accela 600 s Open Autosampler
• Kolonka: Accucore RP-MS, 2.6 µm, 50 × 2.1 mm (17626-052130) s guard kolonkou 10 × 2.1 mm (17626-012105)
• Detekce: Thermo Scientific TSQ Vantage, HESI, pozitivní režim
• Software: Thermo Scientific LC QUAN

Hlavní výsledky a diskuse

Lineární rozsah metody byl pro koncentrace 2 až 100 ng/ml, s koeficientem determinace r2 = 0.991. Střední přesnost QC vzorků (30 ng/ml) byla 106 % (RSD 6.8 %). Chromatografický běh trval 3.5 minuty s ostrými, symetrickými píky amlodipinu (m/z 409.30 → 238.09) a IS nifedipinu (m/z 347.10 → 254.14). Extrakty vykazovaly nízký podíl fosfolipidových a proteinových interferencí.

Přínosy a praktické využití

• SOLA CX výrazně redukuje spotřebu elučního rozpouštědla a dobu sušení vzorku
• Vysoká kvalita extraktů minimalizuje nutnost opakovaných analýz
• Krátký běh na Accucore RP-MS zvyšuje propustnost a snižuje provozní náklady

Budoucí trendy a možnosti využití

Metoda může být rozšířena na multiplexní analýzu dalších kardiovaskulárních léčiv. Další směřování zahrnuje plnou automatizaci přípravy vzorků, miniaturizaci SPE formátů a integraci s ultrarychlou chromatografií nebo HRMS pro farmakokinetické a toxikologické studie.

Závěr

Vyvinutá metoda spojující SOLA CX desky a Accucore RP-MS kolonu nabízí rychlou, přesnou a vysoce reprodukovatelnou analýzu amlodipinu v lidské plasmě. Díky nízké spotřebě rozpouštědel a krátkému analyzačnímu běhu je vhodná pro vysoce propustné bioanalytické a klinické laboratoře.

Reference

1. Stangier J, Su CA. Pharmacokinetics of repeated oral doses of amlodipine and amlodipine plus telmisartan in healthy volunteers. J Clin Pharmacol. 2000, 40(12):1347–1354.
2. Drug Information. www.drugs.com/amlodipine.html. Dated 04/10/2011.
3. DrugBank. www.drugbank.ca/drugs/DB00381. Dated 04/10/2011.