Capecitabine in Human Plasma Using SOLA and Accucore Core Enhanced Technology HPLC Column

Význam tématu

Capecitabine je orální prodrug 5-fluorouracilu, široce používaný při léčbě rakoviny. Spolehlivé stanovení jeho koncentrace v plazmě má klíčový význam pro farmakokinetické studie, monitorování terapie a zajištění kvality léčby.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout rychlou, citlivou a reprodukovatelnou metodu pro kvantifikaci capecitabinu ve vzorcích lidské plazmy o objemu pouhých 100 µl. Studie demonstruje využití nových SOLA SPE cartridgí a Accucore Core Enhanced HPLC kolony v kombinaci s tandemovou hmotnostní spektrometrií.

Použitá metodika

Popis extrakčního postupu:

• Podmínění SOLA SPE cartridge (0,5 ml methanol, 0,5 ml voda).
• Naložení vzorku: 100 µl plazmy.
• Proplach: 200 µl vody/methanol (80:20).
• Eluce: 250 µl methanolu, následné vysušení pod dusíkem a rekonstituce ve 100 µl vody.

Separace pomocí HPLC:

• Kolona: Accucore PFP 2.6 µm, 30 × 2.1 mm.
• Mobilní fáze: A – voda, B – acetonitril, gradient od 100 % A do 100 % B během 5 min.
• Průtok 1,0 ml/min, teplota 40 °C, objem injekce 10 µl.

Použitá instrumentace

• SPE: SOLA 10 mg cartridge/96-well plates (Thermo Scientific).
• Kapalinová chromatografie: Accela 600 pumpa, CTC autosampler.
• Kolona a Guard: Accucore PFP + Defender PFP guard.
• MS/MS: TSQ Vantage se zdrojem HESI v negativním módu.

Hlavní výsledky a diskuse

• Retenční doba capecitabinu: 1,8 min.
• Lineární rozsah 10–1000 ng/ml v plazmě, korelační koeficient R2 = 0,99.
• Obnova (~73 %) a reprodukovatelnost (%RSD = 2,3 @ střední koncentraci).
• Optimalizace SPE proplachu: optimální složení vody/methanolu 80:20 před elucí.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí:

• Minimální spotřebu vzorku (100 µl) a řešení high-throughput analýzy.
• Vysokou selektivitu a citlivost díky MS/MS detekci.
• Snížení spotřeby rozpouštědel a vyšší čistotu extraktů díky SOLA technologii.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metoda je snadno přenositelná na 96-well formát a lze ji rozšířit na další fluoropyrimidinové prodrugs. Očekává se integrace automatizovaných SPE systémů a zrychlení hmotnostních spektrometrů pro ještě vyšší průtok vzorků.

Závěr

Vyvinutá SPE-LC-MS/MS metoda pro stanovení capecitabinu v malých objemech plazmy prokázala rychlost, spolehlivost a reprodukovatelnost. Technologie SOLA a Accucore PFP poskytují robustní a efektivní analytický postup vhodný pro farmakokinetiku a bioanalytiku.

Reference

1. Farkouh A. A Rapid and Simple HPLC Assay for Quantification of Capecitabine for Drug Monitoring Purposes; Anticancer Research. 2010;30:5207–5212.