Thermo Scientific EASY-nLC 1200 System

Význam tématu

Vysoce výkonné nano-kapalinové chromatografické systémy představují klíčový nástroj v proteomice, kde je nezbytné dosáhnout maximální hloubky analýzy, reprodukovatelnosti a vysokého počtu vzorků za den. Zvýšení provozního tlaku a precizní řízení nano-průtoku umožňují lepší separaci peptidů, vyšší identifikaci proteinů a efektivnější využití spektrometrů hmotnostní spektrometrie.

Cíle a přehled studie

Dokument představuje integrovaný chromatografický systém EASY-nLC 1200 od Thermo Scientific, zaměřuje se na jeho vlastnosti, výkonové parametry a přínos pro uživatele v oblasti proteomického výzkumu a rutinní analýzy. Cílem je ukázat, jak systém kombinuje jednoduchost obsluhy s ultra-vysokým provozním tlakem až 1200 bar a jaké výhody to přináší v praxi.

Metodika a instrumentace

Systém EASY-nLC 1200 spojuje čerpadla, autosampler a řídicí počítač v kompaktním modulu s dotykovým displejem a průvodcem nastavením metod. Klíčové komponenty:

• Pumpy s maximálním tlakem 1200 bar pro dlouhé kolony a rychlé nahrávání vzorků
• nanoViper fingertight spojky zaručující minimální mrtvý objem
• údržby prosté přepínací ventily
• Acclaim PepMap analytické kolony (50 a nově 75 cm délky, 75 μm vnitřní průměr)
• formát EASY-Spray pro rychlé „plug-and-spray“ zapojení
• software Xcalibur plně integrovaný s průvodcem nastavení a diagnostickými rutinami

Hlavní výsledky a diskuse

1. Retenční časová přesnost:

• RSD<0,4 % v rozsahu nano-průtoků 100, 300 a 500 nL/min při gradientní době 90, 30 a 18 minut

2. Dlouhodobá stabilita:

• RSD<1 % pro retenční časy napříč 135 po sobě jdoucími injekcemi během osmi dnů

3. Reprodukovatelnost různých set-upů:

• Kompatibilita a srovnatelná výsledná chromatografie jak v jednorourovém, tak před-koncentračním dvourourovém režimu

4. Zvýšení průtoku (throughput):

• Použitím 1200 bar přípravného tlaku se zkracuje doba kolony—equilibrace a nahrávání vzorku, což snižuje celkový cyklus až na 40 minut a zvyšuje počet injekcí až o 49 % (ze 18,5 na 36 injekcí/den u 15 cm kolony)

5. Hloubka proteomické analýzy:

• Srovnání 50 a 75 cm kolony při gradientní době 60, 120 a 240 minut ukázalo nárůst identifikovaných proteinových skupin z přibližně 2900 na 2930 (60 min), z 3838 na 4015 (120 min) a ze 4728 na 4978 (240 min) při 200 ng HELA digestu

Přínosy a praktické využití metody

Systém EASY-nLC 1200 poskytuje:

• Intuitivní ovládání a rychlé nastavení metod bez nutnosti pokročlých znalostí
• Vysokou přesnost a stabilitu retence i při dlouhodobém provozu
• Modularitu pro volbu jednorourového či před-koncentračního přístupku
• Širokou kompatibilitu s nano-ESI zdroji a hmotnostními spektrometry (Q Exactive HF, Orbitrap Fusion Lumos, TSQ Quantiva)
• Možnost dosažení hlubší proteomické pokrytí díky kombinaci delších kolon a vyšších tlaků

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj nano-LC směrem k vyšším tlakům nad 1200 bar, automatizaci údržby pomocí diagnostických algoritmů a umělé inteligence a integraci s on-line frakčními systémy pro multidimenzionální proteomiku. Vývoj nanoviper spojek a kolonu s optimalizovanou stacionární fází pro ještě vyšší rozlišení a šířku špiček.

Závěr

Thermo Scientific EASY-nLC 1200 kombinuje jednoduché uživatelské rozhraní s výkonem pro ultra-dlouhé kolony a provozním tlakem 1200 bar. Systém přináší vysokou přesnost retence, dlouhodobou stabilitu a výrazné zvýšení throughput i proteomické hloubky, což je klíčové pro moderní výzkum proteomiky i rutinní kontrolní analýzy.

Použitá instrumentace

• Thermo Scientific EASY-nLC 1200 systém
• nanoViper fingertight fittings
• Údržby prosté přepínací ventily
• Acclaim PepMap kolony 50 a 75 cm, 75 μm i.d.
• Acclaim PepMap EASY-Spray kolony
• Software Thermo Scientific Xcalibur
• Thermo Scientific EASY-Spray a Nanospray Flex zdroje
• Thermo Scientific Q Exactive HF, Orbitrap Fusion Lumos, TSQ Quantiva hmotnostní spektrometry

Reference

V originálním textu nebyly uvedeny žádné reference.