Setup and transfer of a gradient HILIC method for the impurity analysis of temozolomide

Význam tématu

Hydrofilni interakce v HILIC poskytuje efektivni retenci vysoce polarizovanych molekul, ktere se pri klasickem RP LC hure zadrzuji. To je obzvlast dulezite pro impuritni analytiku citliveho cytostatika temozolomidu, kde standardni isokraticke RP metody vyzadujici iontove parovaci reagent k separaci inilukuji rychlost a citelnost stanoveni.

Cíle a přehled studie

Cilem studie bylo vyvinout rychlou gradientni HILIC metodu pro analyzu pribuznych necistot temozolomidu a demonstrovat bezproblemovy prenos z Agilent 1260 Infinity LC systemu na Thermo Scientific Vanquish Core HPLC. Experimenty zahrnovaly pripravu nucenych degradaci a identifikaci ctyr impurit podle monograf Ph Eur a USP.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda pouziva Syncronis HILIC kolonu (4,6×100 mm, 3 µm) pri 30 °C, mobilni faze A 20 mM acetatu pH 5,1 ve vode a B stejne slozeni v pomeru voda–acetonitril 10/90 v/v. Gradient probehl od 100 % B k 44 % B a zpet v prubehu 12 minut se 6 minutami cyklickeho ekvilibracniho kroku. Detekce pri 266 nm na VWD s odpovidajicim casem odezvy. Prevod z rostleho systemu na Vanquish Core vyzadoval pouziti metodicke sady a udrzeni stejnych vzorku a mobilnich faz.

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizovana metoda dosahla casu mereni 12 minut, znizeneho ekvilibracniho intervalu 6 minut a obhajila koncept casticneho ekvilibracniho stavu pro stabilni retencni casy v HILIC. Pri srovnavani 1260 Infinity a Vanquish Core systemu byly ziskany ekvivalentni chromatogramy s rozdily v retencnich casech mene nez 0,1 min a RSD retencnich casu pod 0,08 % a ploch pod 0,4 %. Vanquish Core system poskytl uzsi piky a o neco vyssi rozliseni diky nizsi extra kolonne produkci. Dynamicka odezva VWD pri prekroceni linearnich rozsahu API se u Vanquish Core babrade vyssi citlivost.

Přínosy a praktické využití metody

Rychla gradientni HILIC metoda zkracuje dobu mereni az o polovinu oproti isokratickym RP metodam farmakopeji, usetri rozpoustedla a umoznuje spolehlivou detekci nizko urovnovych impurit. Bezproblemovy prenos mezi roznymi HPLC platformami zkracuje cas validace a podporuje konsolidaci prace v QC laboratori.

Budoucí trendy a možnosti využití

Ocekava se dalsi rozsirenie HILIC technologií v prumyslove analytice a vyzname metod casticneho ekvilibracniho stavu pro zkraceni doby ekvilibrace. Vyssi unifikace extra kolonnich objemu a elektronicka dokumentace prenosu metod mohou dale zdokonalit interoperabilitu systemu. Vyvoj vysoce propustnych HILIC kolonu s nizkym GDV a pokrocile softwarove nastroje pro automatizovani prenosu slibují vyssi efektivitu a reprodukovatelnost.

Závěr

Byla vyvinuta a uspesne prenesena gradientni HILIC metoda pro impuritni analyzu temozolomidu mezi Agilent 1260 Infinity a Vanquish Core HPLC systemy. Metoda dosahuje rychlejsich iteraci, spolehlive reprodukovatelnych retencnich casu a zkracene ekvilibrace bez nutnosti rozsahle validadce a uprav parametru.

Reference

1. Paul C, Grubner M et al. Thermo Scientific White Paper 72711 An instrument parameter guide for successful UHPLC method transfer 2018
2. Grubner M. Thermo Scientific Application Note 73309 Straightforward transfer of an EP method for impurity analysis of chlorhexidine 2020
3. Mullner T, Franz H. Thermo Scientific Technical Note 73371 Physical adjustment of gradient delay volume for HPLC method transfer 2020
4. European Pharmacopoeia monograph 2780 Temozolomide 10th edition 2018
5. United States Pharmacopeia USP43 NF38 Temozolomide monograph 2020
6. European Pharmacopoeia Ph. Eur., Strasbourg France
7. McCalley DV. A study of column equilibration time in hydrophilic interaction chromatography J Chromatogr A 2018 1554 61–70
8. McCalley DV Managing the column equilibration time in hydrophilic interaction chromatography J Chromatogr A 2020 1612 460655