VITATOX: Stanovení uremických toxinů

Význam tématu

Peritoneální dialýza představuje klíčovou léčebnou modalitu pro pacienty s chronickým selháním ledvin. Efektivní eliminace uremických toxinů, zejména indoxylsulfátu (IS), je zásadní pro prevenci systémových komplikací jako kardiovaskulární onemocnění nebo renální fibrotizace.

Cíle a přehled studie

Cílem práce bylo vyvinout dostupnou a spolehlivou analytickou metodu pro stanovení koncentrace indoxylsulfátu v peritoneálním dialyzátu a krevním séru. Studie zahrnovala přípravu reakčního kitu, úpravu vzorků, kalibraci a validaci metody v různých matricích.

Použitá metodika a instrumentace

Úprava vzorků:

• Deproteinace a uvolnění IS z vazby na albumin pomocí acetonitrilu (ACN) a srážení kyselinou chloristou.
• Vysolení ACN a centrifugace (-20 °C, 10 000 g, 10 min).
• Použití speciální reakční směsi obsahující diazoniový činidlo a surfaktanty pro barevnou reakci.

Měřící metody:

• Spektrofotometrie UV-VIS (UV-1700 PharmSpec, Shimadzu) pro vývoj funkčního kitu.
• UHPLC UltiMate 3000 s elektrochemickou detekcí ED-DAD pro vzorky moči a séra.
• Agilent 1200 Infinity s fluorescenční detekcí FLD pro vzorky dialyzátu.
• Chromatografické kolony Zorbax SB-C18 a Kinetex XB-C18 a optimalizované mobilní fáze (fosfátový pufr/methanol, TFA/ACN).

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala vysokou linearitu v rozsazích:

• Moč: 4–333 µmol/l (R²=0,9949).
• Sérum: 12–400 µmol/l (R²=0,9999).
• Dialyzát: 4–350 µmol/l (R²=0,9989).

Limity detekce (LOD) byly 0,06 µmol/l (moč), 1,48 µmol/l (sérum) a 1–2 µmol/l (dialyzát). Opakovatelnost metody i opakovatelnost měření vykázaly RSD pod 5 %. Správnost stanovení byla 96–101 % s výtěžností blízko 100 %. Diskuse zdůraznila spolehlivost metody i v reálných klinických vzorcích pacientů na peritoneální dialýze.

Přínosy a praktické využití metody

Nová metoda umožňuje:

• Pravidelný monitoring IS u pacientů na peritoneální dialýze.
• Optimalizaci nutriční péče a úpravu bílkovinného příjmu.
• Včasnou detekci změn metabolického stavu a prevenci komplikací.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekávané rozšíření a vylepšení:

• Automatizace předúpravy vzorků a on-line monitorování dialyzátu.
• Integrace více uremických toxinů v jednom analytickém běhu.
• Vývoj mobilních nebo bodových diagnostických zařízení pro domácí použití.

Závěr

Navržená metoda pro stanovení indoxylsulfátu je citlivá, přesná a reprodukovatelná. Je vhodná pro rutinní klinické použití i výzkumný monitoring eliminace uremických toxinů peritoneální dialýzou.

Reference

V textu nebyl uveden explicitní seznam literárních zdrojů.