Development of An UHPLC Method for Simultaneous Determination of Thirteen Bisphenols in Milk Samples

Význam tématu

Bisfenoly A, F a jejich diglycidylestery jsou běžně používané složky plastů a nátěrových hmot ve stycích s potravinami, zejména v kojeneckých lahvích a opakovatelných nádobách. Tyto sloučeniny mohou migrovat do potravin, i když v nízkých koncentracích, a projevují endokrinní účinky. Regulace v EU i USA stanovuje přísné limity migrace bisfenolů, proto je nutná spolehlivá analytická metoda pro jejich simultánní stanovení v potravinových matricích.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout rychlou a vysoce citlivou UHPLC metodu schopnou současně separovat a kvantifikovat třináct bisfenolů v mléčných vzorcích. Studie využila systémy Shimadzu Nexera X2 a fluorescenční detekci k dosažení kratšího času analýzy než u konvenčních HPLC postupů.

Použitá metodika a instrumentace

• UHPLC systém Nexera X2 (Shimadzu) s fluorescenční detektorem RF-20Axs
• Kolona Shim-pack HR-ODS 250×3,0 mm, 3 µm
• Mobilní fáze: gradient vody (A) a acetonitrilu (B) bez přídavných modifikátorů
• Gradient: 0,1 min 30 % B; 13 min 45 % B; 37 min 70 % B; 38–43 min 85 % B; 43,1 min návrat na 30 % B
• Průtok 0,4 mL/min, teplota kolony 30 °C, detekce Ex 235 nm/Em 317 nm, injekce 10 µL
• Příprava kalibračních standardů 5–2000 µg/L ve směsi ACN/H2O (30:70), dvanáct koncentračních úrovní
• Slepé a dva spiked mléčné vzorky (100 a 1000 µg/L) pro ověření přesnosti a návratnosti

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila plnou separaci všech třinácti bisfenolů v čase 7,9–34,3 min, přičemž klíčové páry BADGE-H2O a BADGE-H2O-HCl byly rozlišené v časech 19,9 a 19,4 min. Kalibrační křivky vykázaly lineární závislost s R2 > 0,999. Limit detekce se pohybuje mezi 0,4–1,6 µg/L, limit kvantifikace mezi 1,5–4,7 µg/L. Opakovatelnost (RSD) byla <2,3 % při 5 µg/L a <1 % při 100 µg/L. Návratnosti ve spiked mléce se pohybovaly od 91 do 131 % u raně eluovaných sloučenin a poklesly na 37–47 % u později eluovaných sloučenin.

Přínosy a praktické využití metody

• Výrazné zkrácení doby analýzy oproti tradičním HPLC postupům
• Vysoká citlivost a reprodukovatelnost vhodná pro QA/QC i regulační monitoring
• Možnost přímého nasazení pro kontrolu migrace bisfenolů z obalových materiálů

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření analýzy na další potravinové a biologické matrice
• Integrace s hmotnostní spektrometrií pro komplexnější screening
• Další zkrácení analýzy pomocí menších částic kolon a vyšších tlaků
• Vývoj metodiky pro sledování dalších bisfenolových analogů

Závěr

Navržená UHPLC metoda s fluorescenční detekcí nabízí rychlé, citlivé a reprodukovatelné simultánní stanovení 13 bisfenolů v mléce. Splňuje požadavky legislativy a umožňuje spolehlivý monitoring migrace těchto kontaminantů v potravinářských laboratořích.

Reference

1. Jan Poustka, Lenka Dunovská, Jana Hajšlová, Kateřina Holadová a Ivana Poustková; Czech Journal of Food Sciences, 25(4):221–229 (2007).
2. Ivana Poustková, Jaroslav Dobiáš, Ingrid Steiner, Jan Poustka, Michal Voldřich; European Food Research and Technology, 219:534–539 (2004).
3. Food and Drug Administration; Food additive regulations prohibiting BPA-based epoxy resins in infant formula container linings.
4. Application News No. L408, Shimadzu Corporation.