Choosing the Right Calibration for the Agilent Bio SEC-3 Column
Aplikace | 2017 | Agilent TechnologiesInstrumentace
Size exclusion chromatography (SEC) umožňuje rychlé a selektivní dělení makromolekul dle velikosti v roztoku. Strategická volba kalibrace je zásadní pro spolehlivou detekci a kvantifikaci monomerů, dimérů, agregátů a fragmentů bílkovin či jiných biopolymérů v biotechnologii a farmaceutickém výzkumu.
Cílem tohoto Application Note je demonstrovat optimální volbu kalibračních standardů pro Agilent Bio SEC-3 300Å kolonu. Studie porovnává tři typy kalibrantů (pullulan/polysacharidy, proteinové standardy a syntetické polymery PEG/PEO) a hodnotí jejich vliv na rozsah a linearitu kalibrace.
Metoda umožňuje snadnou a reprodukovatelnou kalibraci SEC kolon přizpůsobenou analyzovanému vzorku. Správný výběr kalibrantů optimalizuje rozlišení v cílovém rozsahu a usnadňuje standardizaci postupů v QA/QC laboratořích i výzkumných projektech bioterapeutik.
Správný výběr kalibračních standardů je klíčový pro dosažení optimálního rozlišení v SEC analýzách. Pro Agilent Bio SEC-3 300Å kolonu jsou pullulan, proteinové standardy a PEG/PEO spolehlivými a snadno interpretovatelnými kalibranty.
Spotřební materiál, LC kolony
ZaměřeníFarmaceutická analýza
VýrobceAgilent Technologies
Souhrn
Význam tématu
Size exclusion chromatography (SEC) umožňuje rychlé a selektivní dělení makromolekul dle velikosti v roztoku. Strategická volba kalibrace je zásadní pro spolehlivou detekci a kvantifikaci monomerů, dimérů, agregátů a fragmentů bílkovin či jiných biopolymérů v biotechnologii a farmaceutickém výzkumu.
Cíle a přehled studie / článku
Cílem tohoto Application Note je demonstrovat optimální volbu kalibračních standardů pro Agilent Bio SEC-3 300Å kolonu. Studie porovnává tři typy kalibrantů (pullulan/polysacharidy, proteinové standardy a syntetické polymery PEG/PEO) a hodnotí jejich vliv na rozsah a linearitu kalibrace.
Použitá metodika a instrumentace
- Kolona: Agilent Bio SEC-3, 300Å, 4,6×300 mm, 3 µm
- Systém: Agilent 1260 Infinity LC
- Eluent: 150 mM fosfátový pufr, pH 7
- Průtok: 0,35 mL/min
- Detektory: refrakční index (RI) pro polysacharidy a glykoly, UV 220 nm pro proteiny
- Kalibranty: Agilent pullulan polysacharidy, PEG 10, PEO 10, proteinové standardy (Sigma-Aldrich)
Hlavní výsledky a diskuse
- Pullulanová kalibrace: lineární rozsah molecular weight 1 000–120 000 g/mol s úzkou polydisperzitou.
- Proteinová kalibrace: pokrytí MW 5 000–1 250 000 g/mol; eluce je ovlivněna 3D strukturou proteinů, nikoli pouze molekulovou hmotností.
- PEG/PEO kalibrace: rozšířený rozsah 1 500–1 250 000 g/mol díky kombinaci glykolů a oxidů.
- Porovnání křivek ukázalo, že proteiny elují později než kalibranty stejné hmotnosti, což potvrzuje závislost na hydrodynamickém objemu.
Přínosy a praktické využití metody
Metoda umožňuje snadnou a reprodukovatelnou kalibraci SEC kolon přizpůsobenou analyzovanému vzorku. Správný výběr kalibrantů optimalizuje rozlišení v cílovém rozsahu a usnadňuje standardizaci postupů v QA/QC laboratořích i výzkumných projektech bioterapeutik.
Budoucí trendy a možnosti využití
- Integrace s multiúhlovými rozptylovými detektory pro přesnější stanovení molární hmotnosti a hydrodynamického poloměru.
- Automatizace kalibrace a high-throughput workflow pro screening biologických přípravků.
- Vývoj kalibrantů napodobujících specifické konformace biopolymerů.
- Miniaturizace SEC kolon (kapilární a monolitické) pro rychlejší a úspornou analýzu.
Závěr
Správný výběr kalibračních standardů je klíčový pro dosažení optimálního rozlišení v SEC analýzách. Pro Agilent Bio SEC-3 300Å kolonu jsou pullulan, proteinové standardy a PEG/PEO spolehlivými a snadno interpretovatelnými kalibranty.
Reference
- Mapp K. Choosing the Right Calibration for the Agilent Bio SEC-3 Column. Agilent Technologies; 2017. Application Note 5991-2463EN.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Calibrating your Agilent AdvanceBio SEC Columns
2017|Agilent Technologies|Technické články
Calibrating your Agilent AdvanceBio SEC Columns Technical Overview Author Introduction Andy Coffey Agilent AdvanceBio SEC columns are specifically designed for aqueous size exclusion chromatography (SEC) of biomolecules. The particles have been manufactured using proprietary technology to combine optimum pore size…
Klíčová slova
mau, maumin, minpeo, peotime, timeadvancebio, advancebiopolysaccharide, polysaccharidepore, porepeg, pegdaltons, daltonsretention, retentioncalibrating, calibratingsec, secbsa, bsadimer, dimerprotein
SIZE EXCLUSION CHROMATOGRAPHY FOR BIOMOLECULE ANALYSIS
2015|Agilent Technologies|Příručky
Agilent “How to” Guide for SIZE EXCLUSION CHROMATOGRAPHY FOR BIOMOLECULE ANALYSIS A GUIDE TO SUCCESSFUL SEC The chromatographic separation of biomolecules based on their size in solution is known as size exclusion chromatography (SEC). Unlike other modes of chromatography, it…
Klíčová slova
size, sizemau, mausec, secpore, porecolumn, columnproteins, proteinsmolecular, molecularweight, weightexclusion, exclusioncolumns, columnspolypropylene, polypropylenesmaller, smallershould, shouldagilent, agilentsample
AGILENT GPC/SEC POLYMER STANDARDS
2017|Agilent Technologies|Brožury a specifikace
AGILENT GPC/SEC POLYMER STANDARDS Contents POLYMER STANDARDS FOR GPC/SEC���������������������������������������������������������������������������������������������������� 3 InfinityLab EasiVial�������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������5 InfinityLab EasiCal��������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������8 Polystyrene Standards������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������9 Polymethylmethacrylate Standards�����������������������������������������������������������������������������������������������������������������11 Polyethylene glycol/oxide Standards��������������������������������������������������������������������������������������������������������������13 Polyacrylic acid Standards���������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������15 TECHNIQUE REVIEW���������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������� 16 Agilent Publications��������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������18 Agilent GCP/SEC Analysis systems����������������������������������������������������������������������������������������������������������������19 1976 PLgel columns, individual standards, and standard…
Klíčová slova
easivial, easivialgpc, gpcinfinitylab, infinitylabsec, secstandards, standardspolymethylmethacrylate, polymethylmethacrylatepeg, pegpolymer, polymertri, trinominal, nominalpeo, peopack, packpolystyrene, polystyreneyes, yeseasical
ANALYSIS OF BIODEGRADABLE POLYMERS BY GPC/SEC - Application compendium
2015|Agilent Technologies|Příručky
Application compendium BIODEGRADABLE POLYMERS ANALYSIS OF BIODEGRADABLE POLYMERS BY GPC/SEC Authors Graham Cleaver Agilent Technologies, Inc. Contents Page Studying biodegradable polymers..................................................................................... 3 Synthetic polymers Poly(lactide-co-glycolide) ......................................................................................................4 Polycaprolactam ......................................................................................................................4 Polyvinyl alcohol .....................................................................................................................5 Polyethylene glycol .................................................................................................................5 Naturally-occuring polymers Natural rubber .........................................................................................................................8 Polyacrylic…
Klíčová slova
polymers, polymerslog, logbiodegradable, biodegradabledlogm, dlogmcellulose, cellulosegpc, gpcpullulan, pullulanpolysaccharides, polysaccharidesmin, minchitosan, chitosanrubber, rubbernaturally, naturallypolymer, polymerviscosity, viscositysec