A High Sensitivity Method for the Quantifi cation of Fluvastatin in Plasma Using an Agilent 1290 Infi nity Binary LC and an Agilent 6490 Triple Quadrupole Mass Spectrometer

Význam tématu

Citlivé a přesné stanovení farmaceutických látek v lidské plazmě je zásadní pro bioanalytické studie a farmakokinetické hodnocení. Fluvastatin, léčivo ze skupiny statinů, se v organizmu rychle metabolizuje, což vyžaduje metody s nízkým limitem detekce a vysokou spolehlivostí.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem byla konstrukce a validace LC/MS/MS metody pro kvantifikaci fluvastatinu v lidské plazmě pomocí Agilent 1290 Infinity Binary LC a Agilent 6490 Triple Quadrupole MS. Metoda využívá deuterovaného fluvastatinu-d6 jako interní standard a umožňuje měření v rozsahu 0,2 až 50 ng/mL s limitem detekce 0,1 ng/mL.

Použitá metodika a instrumentace

• Instrumentace
  
  • LC: Agilent 1290 Infinity Binary LC (flexible cube, binary pump, autosampler, ALS Thermostat, TCC)
  • MS: Agilent 6490 Triple Quadrupole Mass Spectrometer
  • Kolona: Agilent Eclipse Plus Phenyl Hexyl RRHD 2,1 × 50 mm, 1,8 µm při 40 °C
  • Mobilní fáze A: 10 mM ammonium acetát, B: acetonitril; gradient 30→90→30 % ACN, průtok 0,5 mL/min
  • Injekční objem: 5 µL
• Příprava vzorků
  
  • Proteinová precipitace s 600 µL ledového acetonitrilu, centrifugace, vakuové koncentrování
  • Rekonstrukce v 200 µL směsi mobilních fází A:B (8:2) a filtrace
  • Kalibrace: plazma obohacená fluvastatinem 0,2–50 ng/mL; QC vzorky: 0,75, 5, 40 ng/mL

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala vynikající linearitu (R2 > 0,995) v rozsahu 0,2–50 ng/mL. LOD byl stanoven na 0,1 ng/mL, LLOQ na 0,2 ng/mL. Intra- i interdenní přesnost a opakovatelnost byly v rámci ±15 % pro všechny úrovně QC. Díky backflushi a důkladnému mytí jehly byl zanedbatelný carryover. Extrahované MRM chromatogramy potvrdily selektivitu a citlivost metody.

Přínosy a praktické využití metody

• Rutinní bioanalýzy fluvastatinu v klinickém výzkumu
• Podpora farmakokinetických a farmakodynamických studií
• QA/QC v průmyslových a regulačních laboratořích

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metody na další statiny a metabolity
• Snížení požadovaného objemu vzorku pro pediatrické a vzácné aplikace
• Automatizace přípravy vzorků a integrace s robotickými systémy
• Využití vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie pro multiplexní analýzy
• Adaptace metody pro sušinu krve (DBS) a neinvazivní vzorky

Závěr

Vyvinutá LC/MS/MS metoda poskytuje citlivé, přesné a reprodukovatelné stanovení fluvastatinu v lidské plazmě. Díky robustnímu designu a nízkému carryover je vhodná pro rutinní bioanalytické měření a klinické studie.

Reference

• Guidance for Industry: Bioanalytical Method Validation, FDA (2001)
• Kailasam S. Determination of fluvastatin in plasma using the Agilent 6410B Triple Quadrupole LC/MS system coupled with the Agilent 1200 Series Rapid Resolution LC system. Agilent Technologies Application Note 5989-9751EN (2014)