Determination of Dapsone in Bovine Muscle with Agilent Bond Elut SPE and LC/MS/MS

Význam tématu

Detekce reziduí léčiv v potravinářských matricích je klíčová pro zajištění bezpečnosti potravin a souladu s legislativními limity. Dapsone je antimikrobiální látka, jejíž přítomnost v mase musí být monitorována na velmi nízkých koncentracích (sub-ppb) kvůli možným zdravotním rizikům konzumentů.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a validovat citlivou, reprodukovatelnou a relativně rychlou metodu pro kvantifikaci dapsone v hovädzím svalstvu. Postup kombinuje jednoduchou extrakci a očistu vzorku pomocí pevné fáze (SPE) s vysoce účinnou chromatografií a tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC/MS/MS).

Použitá metodika a instrumentace

Vzorkování a příprava:

• 2 g homogenizovaného masa extrahováno 10 mL acetonitrilu, defatování hexanem, centrifugace
• nízkopH extrakce přidáním 10 mL roztoku 1 M HCl ve vodě

Očista SPE:

• Agilent Bond Elut Plexa PCX (60 mg, 3 mL)
• prekondice 3 mL methanolu a 3 mL vody
• naložení extraktu (ekvivalent 2 g vzorku), rychlost průtoku 1 mL/min
• oplach 5 mL 0,1 mol/L HCl a 5 mL methanolu
• vysušení pod negativním tlakem
• eluace 5 mL 25 % NH4OH v acetonitrilu
• suché koncentrování, rekonstituce na 1 mL ve 15 % acetonitrilu ve vodě, filtrace 0,2 µm

LC/MS/MS podmínky:

• LC kolona Agilent Poroshell 120 SB-C18, 2,1×100 mm, 2,7 µm
• mobilní fáze A: 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě, B: acetonitril; gradient 15→80 % B za 8 min, průtok 0,3 mL/min, injekce 10 µL
• MS Agilent 6460 Triple Quadrupole, ESI+, Jet Stream; tranzice MRM 249,1→92 (CE 24), 249,1→108 (CE 20)

Hlavní výsledky a diskuse

Linearity a citlivost:

• křivka v rozsahu 0,25–5 µg/kg, R2=0,9998
• mez detekce (LOD) 0,02 µg/kg (S/N>3)

Obnova a reprodukovatelnost:

• rekonstrukce při 0,5 µg/kg: 88,9 % (RSD 9,7 %)
• rekonstrukce při 1,0 µg/kg: 96,5 % (RSD 5,7 %)
• rekonstrukce při 2,0 µg/kg: 92,8 % (RSD 3,8 %)

Chromatogramy potvrzují ostrý tvar píku dapsone bez rušivých interferencí.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje spolehlivé a rutinní stanovení dapsone v mase při velmi nízkých koncentracích. Postup je vhodný pro laboratoře zaměřené na QA/QC potravinářské bezpečnosti a splňuje požadavky na rychlost, citlivost i reprodukovatelnost.

Budoucí trendy a možnosti využití

• rozšíření na více reziduí léčiv v jediné analýze (multireziduální screening)
• automatizace SPE pro vyšší průtok vzorků
• aplikace miniaturizovaných SPE kartáčů a on-line spojení s LC/MS
• použití vysoce rozlišující HRMS pro potlačení maticových interferencí

Závěr

Vyvinutá metoda spojuje efektivní SPE očistu s LC/MS/MS analýzou a poskytuje vysokou citlivost, přesnost i reprodukovatelnost pro stanovení dapsone v hovädzím svalstvu na sub-ppb úrovni.

Reference

Zhai A., Yang Y. Determination of Dapsone in Bovine Muscle with Agilent Bond Elut SPE and LC/MS/MS. Agilent Technologies Application Note, 2014.