Fast Quantitative Analysis of Aminoglycoside Antibiotic Residues in Meat, Eggs and Milk and Identity Confirmation with MRM Spectrum Mode

Význam tématu

Monitoring reziduí aminoglykosidů v potravinách je klíčový pro ochranu spotřebitelů před jejich ototoxicitou a nefrotoxicitu. Přesné stanovení zbytků v mase, vejcích a mléce zajišťuje dodržování maximálních limitů reziduí (MRL) stanovených regulačními orgány a minimalizuje riziko expozice.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout rychlou a citlivou metodu pro kvantifikaci a potvrzení identity aminoglykosidů v různých potravinových matricích (hovězí maso, kuřecí prsa, játra, vepřové a mléko). Výzkum zahrnoval optimalizaci přípravy vzorku, použití HILIC chromatografie a detekci pomocí triple-kvadrupolového MS v režimu MRM a MRM Spectrum.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky byly homogenizovány a extrahovány dvakrát kyselým pufrem po přidání interního standardu ribostamycinu. Extrakty se čistily na slabě kationtové výměnné SPE a ředily 5× před injekcí 5 µL.

Chromatografie probíhala na HILIC fázích s gradientem acetonitrilu a formátového pufru; cyklus analýzy trval 4,5 minuty. Detekce se prováděla na LCMS-8060 v režimu MRM se dvěma tranzicemi na sloučeninu. Pro vzorky překračující MRL byla navíc aplikována druhá analýza s prodlouženým gradientem a 15 tranzicemi pro každou analytu pro generování MRM spektra.

Instrumentace:

• Nexera X2 UHPLC
• LCMS-8060 triple-kvadrupol
• Software LabSolutions Insight verze 3.1 se Screening modulem

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivky pokrývaly rozsahy od 10 % nejnižšího do 150 % nejvyššího MRL (nebo standardního 10 µg/kg pro neregulované látky) s přesností 85 – 115 %. Rekonkovatelnost (recovery) ve všech matricích se pohybovala mezi 70 – 120 %, opakovatelnost (% RSD) byla nižší než 20 %.

Identifikace pomocí MRM Spectrum a knihovního vyhledávání prokázala vysoké skóre (např. dihydrostreptomycin: 95 vs. streptomycin: 51), což významně zvýšilo jistotu potvrzení přítomnosti reziduí.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlé, citlivé a vysoce průchodné stanovení aminoglykosidů bez použití iontových párů, které by mohly kontaminovat analytický systém. Vhodná je pro rutinní testování potravinářských vzorků a pro QA/QC laboratoře díky minimálním maticovým interferencím a možnosti automatizace.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření knihoven MRM Spectrum a pokročilá automatizace identifikace povedou k efektivnějšímu screeningu. Integrace vysokorozlišovacího MS a vylepšení softwaru pro nelineární kalibraci dále zvýší citlivost a selektivitu. Metoda je snadno adaptovatelná na další rezidua veterinárních léčiv a širokou škálu potravinových matric.

Závěr

Vyvinutý Method Package úspěšně kombinuje rychlou kvantitativní HILIC-MS/MS analýzu a doplňkovou identifikaci MRM Spectrum. Prokázal splnění požadavků na přesnost, reprodukovatelnost a robustnost v různých potravinových matricích bez potřeby matrix-matched kalibrace.