Analysis of Catecholamines and Metanephrines in Urine

Význam tématu

Catecholaminy a jejich metabolity metanephriny představují klíčové biomarkery pro diagnostiku neuroendokrinních poruch, jako jsou feochromocytom a další onemocnění nadledvin. Spolehlivá a citlivá kvantifikace v moči je nezbytná pro včasné odhalení patologií a pro sledování účinnosti terapie.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a validovat rychlou, přesnou a vysoce citlivou metodu pro simultánní stanovení katecholaminů (dopamin, epinefrin, norepinefrin) a jejich metylovaných produktů (metanephriny, normetanephriny, 3-methoxytyramin) v moči. Metoda kombinuje pevnou fázi (SPE) pro očistu vzorku s kapalinovou chromatografií a tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC-MS/MS).

Použitá metodika a instrumentace

• SPE extrakce: sloučeniny byly koncentrikovány a očištěny na 96-well destičce EVOLUTE® EXPRESS WCX (Biotage) pomocí automatizovaného systému Biotage Extrahera.
• Chromatografie: C18-PFP kolona (ACE-Excel), mobilní fáze A – 0,25 mM amonný formiát ve vodě, mobilní fáze B – 0,25 mM amonný formiát v methanolu; průtok 0,4 mL/min, doba analýzy 7,5 min.
• MS/MS detekce: LCMS-8060 triple kvadrupólový spektrometr v režimu SRM; pro každý analyzát byl monitorován dehydrátovaný ion jako prekurzor (s výjimkou epinefrinu) pro minimalizaci matričních interferencí.

Hlavní výsledky a diskuse

• Linearita: všechny analyty vykázaly koeficient determinace R2 ≥ 0,99 v rozsazích od 0,125 do 125 ng/mL (3-methoxytyramin od 0,25 ng/mL, dopamin od 0,625 ng/mL, epinefrin a norepinefrin do 250 ng/mL).
• Přesnost a opakovatelnost: účinnost extrakce 92–117 %, přičemž %RSD stanovené na úrovni LOQ (limit kvantifikace) zůstávaly pod 18 % pro všechny sloučeniny.
• SPE prokázala vysokou selektivitu a schopnost odstraňovat matriční interference s minimálními ztrátami analytů.
• Automatizace procesu urychluje přípravu vzorků a zvyšuje reprodukovatelnost.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda poskytuje rychlé a citlivé stanovení katecholaminů a metanephrinů v klinických laboratořích. Umožňuje včasnou diagnostiku a monitorování nádorů chromafinních buněk a dalších neuroendokrinních onemocnění. Díky automatizované extrakci lze zpracovat vysoký počet vzorků za den a dosáhnout konzistentních výsledků.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace s vysokorychlostními hmotnostními spektrometry a dalšími automatizovanými moduly pro ještě vyšší průtok vzorků.
• Rozšíření spektra analyzovaných metabolit pro komplexní metabolomické profily.
• Nasazení strojového učení pro zpracování dat a prediktivní diagnostiku.
• Vývoj miniaturizovaných zařízení pro bodové měření (point-of-care) v ambulantní praxi.

Závěr

Vyvinutá metoda na bázi SPE-LC-MS/MS na přístroji LCMS-8060 prokazuje vysokou citlivost, přesnost a spolehlivost kvantifikace katecholaminů a metanephrinů v moči. Automatizovaná extrakce a rychlý chromatografický běh přispívají k efektivitě a robustnosti analýzy, což je klíčové pro rutinní klinické a výzkumné aplikace.

Reference

• Neuvádí se žádné explicitní literární zdroje