LC-MS Grade Solvents and Reagents

Význam tématu

Liquidní chromatografie hmotnostní spektrometrie (LC-MS) je nezbytnou technikou v moderní analytické chemii pro dosažení vysoké citlivosti, specificity a rychlosti analýzy. Čistota použitých rozpouštědel, přísad a reagentů přímo ovlivňuje kvalitu měření, stabilitu základní čáry a životnost kolony. Využití vysoce čistých LC-MS grade produktů eliminuje rušivé šumové signály a potlačení ionizace, které jsou způsobeny přítomností stopových kontaminantů, jako jsou alkaliové ionty, plastifikátory či surfaktanty.

Cíle a přehled studie / článku

Shrnutí přináší přehled portfolia vysoce čistých rozpouštědel (LiChrosolv®, LiChropur®), mobilních fází, pre-blendovaných směsí, přísad (kyseliny, soli, zesilovače ionizace) a derivatizačních reagentů pro LC-MS aplikace. Součástí je i aplikace UHPLC-MS separace pěti analogů insulinu v komplexním biologickém matrixu (plazma) s využitím difluoroctové kyseliny (DFA) pro minimalizaci potlačení signálu.

Použitá metodika a instrumentace

• Stanovení čistoty reagentů metodou flow injection analysis – FIA-MS s referenčním analytem reserpinem; test intenzity signálu [M+H]+ a hladiny pozadí.
• Chromatografická separace analogů insulinu na sloupci BIOshell™ A160 Peptide C18 (2,7 µm, 15 cm × 2,1 mm) při 75 °C, gradient DFA v H2O/ACN, průtok 0,2 mL/min.
• Detekce ESI (+) na Agilent® 1290/6530 Q-TOF a UV detekce na Thermo Ultimate BioRS 3000 UHPLC.

Použitá instrumentace

• Bruker Esquire 3000+ ion trap MS (ESI+, m/z 50–2000)
• Thermo Ultimate™ BioRS 3000 UHPLC systém s UV detekcí
• Agilent® 1290 Infinity II/6530 Q-TOF MS (ESI+)

Hlavní výsledky a diskuse

• Vysoce čisté acetonitrily LiChrosolv® hypergrade a LiChropur® hypergrade vykázaly výrazně vyšší intenzitu signálu reserpinu a nižší úroveň šumu oproti běžným LC-gradům a konkurenčním produktům.
• FIA-MS test prokázal nízký obsah kovových a alkalických kontaminantů (K, Na, Al, Fe ≤ 5 ppb), což minimalizuje aduktaci a potlačení ionizace.
• UHPLC separace pěti analogů insulinu v plazmě pomocí DFA mobilní fáze umožnila rozlišení látek odlišujících se o jeden či několik aminokyselin s dostatečnou opakovatelností a citlivostí.

Přínosy a praktické využití metody

Použití předmísených mobilních fází a vysoce čistých reagencií snižuje riziko kontaminace, šetří čas při přípravě a prodlužuje životnost chromatografické kolony. Metody nacházejí uplatnění v proteomice, metabolomice, farmacii, forenzní analýze a QA/QC v průmyslových laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další vývoj selektivních přísad pro cílenou ionizaci specifických tříd analyzátorů.
• Automatizace a miniaturizace přípravy vzorků s ultrajemným čištěním.
• Integrace vysokorozlišovací MS systémů pro komplexní biologické a environmentální matrixe.

Závěr

Kvalita rozpouštědel a přísad je klíčová pro dosažení reprodukovatelných a vysoce citlivých LC-MS analýz. Portfolio LiChrosolv® a LiChropur® nabízí řešení s garantovaným nízkým obsahem kontaminantů, podporující moderní aplikace v analytické chemii.

Reference

• Zaikin V, Halket J. A handbook of derivatives for mass spectrometry. Chichester: IM Publications LLP; 2009.
• Santa T. Derivatization in liquid chromatography for mass spectrometric detection. Drug Discov. Ther. 2013;7:9-17.
• Santa T. Derivatization reagents in LC/ESI-MS/MS. Biomed Chromatogr. 2011;25:1-10.
• Santa T, Al-Dirbashi OY, Fukushima T. Derivatization reagents in LC/ESI-MS/MS for biomedical analysis. Drug Discov. Ther. 2007;1:108-118.