Quantitative Analysis of Dried Bloodspot 17-Hydroxyprogesterone by ACQUITY UPLC-MS/MS for Clinical Research
Aplikace | 2014 | WatersInstrumentace
17-hydroxyprogesteron je důležitý biomarker používaný zejména v neonatální screeningové diagnostice poruch nadledvin a v širším klinickém výzkumu. Metoda založená na DBS vzorcích přináší jednoduchou odběrovou proceduru, stabilitu analytů a minimální nároky na skladování.
Cílem studie bylo vyvinout rychlou, selektivní a reprodukovatelnou metodu pro kvantifikaci 17-OHP v suchých krevních skvrnách (DBS) bez nutnosti derivatizace. Kombinací tekutinové extrakce a UPLC-MS/MS se hodnotila linearita, citlivost a analytická přesnost.
Ze standardizovaných 3 mm kruhů DBS se extrahovalo 17-OHP pomocí směsi acetonu a acetonitrilu s vnitřním standardem (deuterovaný 17-OHP). Extrakt se poté na sucho odpařil a rekonstituoval v mobilní fázi před analýzou. Vanoucí gradient na HSS T3 kolonce umožnil separaci hlavních steroidů během 3,5minutové analýzy.
Metoda prokázala lineární kvantifikaci 17-OHP v rozsahu 9,9–1270 nmol/L (r2 > 0,997) s LLOQ 1,6 nmol/L a LOD 0,5 nmol/L. Mezi- a vnitrobatchová variabilita byla < 6,7 % CV. Průměrná výtěžnost extrakce dosáhla 58 % a potlačení signálu vlivem matrice činilo ~15 %. Kvalitativní sledování ionizační suprese potvrdilo, že 17-OHP, kortizol ani androstenedion neelutují v oblastech významného potlačení signálu.
Krátká doba analýzy a jednoduchá příprava vzorku z DBS přinášejí vysokou efektivitu a spolehlivost v klinickém výzkumu. Metoda eliminuje interferenci imunoanalytických technik, podporuje standardizaci a umožňuje vysokokapacitní screening steroidů.
Další rozvoj může zahrnovat plnou automatizaci odběru a přípravy DBS, rozšíření panelu sledovaných steroidů a nasazení v populačních screenincích. Implementace v mobilních laboratořích či bodových diagnostických platformách rozšíří dostupnost testování na vzdálených pracovištích.
Popsaná UPLC-MS/MS metoda poskytuje citlivou, selektivní a robustní kvantifikaci 17-OHP z DBS. Díky rychlému odezvu a jednoduché extrakcí vzorku je vhodná pro klinický výzkum a potenciálně pro rutinní diagnostiku endokrinních poruch.
LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
ZaměřeníKlinická analýza
VýrobceWaters
Souhrn
Význam tématu
17-hydroxyprogesteron je důležitý biomarker používaný zejména v neonatální screeningové diagnostice poruch nadledvin a v širším klinickém výzkumu. Metoda založená na DBS vzorcích přináší jednoduchou odběrovou proceduru, stabilitu analytů a minimální nároky na skladování.
Cíle a přehled studie / článku
Cílem studie bylo vyvinout rychlou, selektivní a reprodukovatelnou metodu pro kvantifikaci 17-OHP v suchých krevních skvrnách (DBS) bez nutnosti derivatizace. Kombinací tekutinové extrakce a UPLC-MS/MS se hodnotila linearita, citlivost a analytická přesnost.
Použitá metodika
Ze standardizovaných 3 mm kruhů DBS se extrahovalo 17-OHP pomocí směsi acetonu a acetonitrilu s vnitřním standardem (deuterovaný 17-OHP). Extrakt se poté na sucho odpařil a rekonstituoval v mobilní fázi před analýzou. Vanoucí gradient na HSS T3 kolonce umožnil separaci hlavních steroidů během 3,5minutové analýzy.
Použitá instrumentace
- ACQUITY UPLC System
- ACQUITY HSS T3 kolonka s VanGuard prekolonkou
- Xevo TQ MS detektor s ESI pozitivním ionizačním zdrojem
- TruView Maximum Recovery lahvičky
- Software MassLynx verze 4.1 s modulem TargetLynx
Hlavní výsledky a diskuse
Metoda prokázala lineární kvantifikaci 17-OHP v rozsahu 9,9–1270 nmol/L (r2 > 0,997) s LLOQ 1,6 nmol/L a LOD 0,5 nmol/L. Mezi- a vnitrobatchová variabilita byla < 6,7 % CV. Průměrná výtěžnost extrakce dosáhla 58 % a potlačení signálu vlivem matrice činilo ~15 %. Kvalitativní sledování ionizační suprese potvrdilo, že 17-OHP, kortizol ani androstenedion neelutují v oblastech významného potlačení signálu.
Přínosy a praktické využití metody
Krátká doba analýzy a jednoduchá příprava vzorku z DBS přinášejí vysokou efektivitu a spolehlivost v klinickém výzkumu. Metoda eliminuje interferenci imunoanalytických technik, podporuje standardizaci a umožňuje vysokokapacitní screening steroidů.
Budoucí trendy a možnosti využití
Další rozvoj může zahrnovat plnou automatizaci odběru a přípravy DBS, rozšíření panelu sledovaných steroidů a nasazení v populačních screenincích. Implementace v mobilních laboratořích či bodových diagnostických platformách rozšíří dostupnost testování na vzdálených pracovištích.
Závěr
Popsaná UPLC-MS/MS metoda poskytuje citlivou, selektivní a robustní kvantifikaci 17-OHP z DBS. Díky rychlému odezvu a jednoduché extrakcí vzorku je vhodná pro klinický výzkum a potenciálně pro rutinní diagnostiku endokrinních poruch.
Reference
- Wong T et al Identification of the steroids in neonatal plasma that interfere with 17α-hydroxy-progesterone radioimmunoassays Clin Chem 1992 38 1830–1837
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Analysis of Serum 17-Hydroxyprogesterone, Androstenedione, and Cortisol by UPLC-MS/MS for Clinical Research
2014|Waters|Aplikace
Analysis of Serum 17-Hydroxyprogesterone, Androstenedione, and Cortisol by UPLC-MS/MS for Clinical Research Heather A Brown,1 Claudia Rossi,2 and Lisa J Calton1 1 Waters Corporation, Wilmslow, UK 2 Department of Biomedical Science, G. d’Annunzio University Foundation, Pescara, Italy A P P…
Klíčová slova
cortisol, cortisoluplc, uplcquantifier, quantifiertruview, truviewandrostenedione, androstenedioneanalyte, analyteplno, plnowere, wereserum, serumformic, formicresponse, responserecovery, recoveryion, ionmanager, managerclinical
Analysis of Plasma 17-Hydroxyprogesterone, Androstenedione, and Cortisol Using a Novel Solid-Phase Extraction (SPE) Sorbent, Oasis PRiME HLB, for UPLC-MS/MS Analysis in Clinical Research Jonathan P. Danaceau and Erin E. Chambers Waters Corporation, Milford, MA, USA A P P L I…
Klíčová slova
cortisol, cortisoladione, adionemean, meanandrostenedione, androstenedionephospholipids, phospholipidsoasis, oasisprime, primeuplc, uplceffects, effectshlb, hlbextraction, extractionmatrix, matrixcotisol, cotisolprecipitation, precipitationconsistency
Analysis of Corticosteroids and Androgens in Serum for Clinical Research
2017|Waters|Aplikace
[ APPLICATION NOTE ] Analysis of Corticosteroids and Androgens in Serum for Clinical Research Dominic Foley and Lisa Calton Waters Corporation, Wilmslow, UK APPLICATION BENEFITS ■■ ■■ Analytical selectivity of the Steroid hormones encompass a large class of small molecules…
Klíčová slova
mean, meancortisol, cortisoleqa, eqadheas, dheasandrostenedione, androstenedionetestosterone, testosteroneandrogens, androgensnmol, nmolcorticosteroids, corticosteroidsclinical, clinicaldifference, differenceagreement, agreementserum, serumresearch, researchsteroid
A Rapid and Analytically Sensitive LC-MS Method for the Simultaneous Analysis of a Panel of Steroid Hormones for Clinical Research
2014|Waters|Aplikace
A Rapid and Analytically Sensitive LC-MS Method for the Simultaneous Analysis of a Panel of Steroid Hormones for Clinical Research Laura Owen and Brian Keevil; University Hospital South Manchester, UK G OA L To demonstrate that the use of an…
Klíčová slova
steroid, steroidbablok, bablokdheas, dheashormones, hormonesosm, osmpassing, passingfit, fittestosterone, testosteronespe, speclinical, clinicalandrostenedione, androstenedionescatter, scatteronline, onlineresearch, researchidentity
