ADDING COST EFFECTIVE MASS DETECTION AS AN ORTHOGONALTECHNIQUE FOR IMPROVED PRODUCTIVITY AND CONFIDENCEIN THE ANALYSIS OF PROTEIN BIOTHERAPEUTICS

Význam tématu

Proteomické analýzy peptidů hrají zásadní roli v hodnocení klíčových kvalitativních atributů (CQA) bioterapeutik, jakými jsou identita, čistota a homogenita výrobku.

Cíle a přehled studie / článku

Studie demonstruje integrovaný analytický přístup spojující optickou detekci (UV) a cenově dostupnou hmotnostní detekci pomocí zařízení ACQUITY QDa pro efektivní sledování CQAs modelové monoklonální protilátky (trastuzumab) v jediném pracovním postupu.

Použitá metodika a instrumentace

• LC systém: ACQUITY UPLC H-Class
• UV detektor: ACQUITY UPLC TUV, 215 nm
• Hmotnostní detektor: ACQUITY QDa; rozsah 350–1250 Da, vzorkovací frekvence 2 body/s, kónické napětí 10 V, kapilární napětí 1,5 kV, teplota sondy 500 °C
• RPLC kolony: CSH C18 130 Å, 1,7 µm, 2,1 × 100 mm; BEH C18 300 Å, 1,7 µm, 2,1 × 100 mm; glykanová kolona BEH Amide 130 Å, 1,7 µm, 2,1 × 150 mm
• Mobilní fáze: A – voda/TFA 0,1 %; B – acetonitril/TFA 0,1 %; C – voda/FA 0,1 %; D – acetonitril/FA 0,1 %
• Gradientní eluce a objem injekce 8 µL (4 µg)
• Příprava vzorku: trypsinová štěpiva trastuzumabu, uvolňování a značení N-glykánů RapiFluor-MS (30 min)

Hlavní výsledky a diskuse

Integrace QDa s UV detekcí přinesla následující výhody:

• Vysoká specifičnost: selektivní sledování iontů přispívá k přesnější kvantifikaci částečně souelujících složek
• Homogenita: MS rozlišení odhaluje koelující peptidy, které UV detekce nerozliší (např. oxidovaná vs. neoxidovaná forma peptidu T21)
• Senzitivita: monitorování nízce abundantních modifikací CDR peptidu T3-4 (deamidace) pomocí SIR
• Přesnost hmotnostních měření: hmotnostní chyba pod 0,3 Da pro peptidy v rozsahu 500–7000 Da
• Podpora identity a účinnosti: extrakce CDR peptidových profilů pro potvrzení identity trastuzumabu a sledování glykosylačního vzoru

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje zvýšení produktivity a snížení nákladů ve vývoji bioterapeutik díky propojení konvenčních LC-UV postupů s hmotnostní detekcí bez nutnosti složitých instrumentálních konfigurací.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření použití kompaktních hmotnostních detektorů v rutině QC pro:

• šířku sledovaných modifikací proteinů (oxidace, deamidace, glykosylace)
• rychlé screeningové aplikace v bioprocesech
• kombinaci s automatizovanými platformami pro zvýšení průchodnosti laboratoří

Závěr

Studie potvrzuje, že zařízení ACQUITY QDa je vhodné pro rutinní sledování CQA bioterapeutik, nabízí zvýšenou jistotu dat a snadnou integraci do existujících LC-UV protokolů.

Reference

Ve vstupním textu nebyly uvedeny žádné literární zdroje.