Monitoring Multiple Attributes in a Single Assay Using the ACQUITY QDa Detector for Product Confirmation and Process Monitoring of Product Quality Attributes
Aplikace | 2017 | WatersInstrumentace
V biotechnologickém průmyslu roste poptávka po metodách schopných současně sledovat více klíčových atributů biologických léčiv na molekulární úrovni. Tradiční opticky založené chromatografické testy často identifikují pouze retenci látek, nikoli jejich molekulární vlastnosti. Zavedení jednoho LC-MS postupu pro více atributů umožňuje systematicky a efektivně kontrolovat kvalitu bílkovinných terapeutik, podporovat koncept Quality by Design a zvyšovat spolehlivost procesů výroby i kontaminace.
Studie demonstruje proof of concept pro jeden analytický běh, který současně potvrdí identitu monoklonální protilátky trastuzumab pomocí CDR peptidů a sleduje vybrané posttranslační modifikace (deamidace, oxidace, glykosylace). Pro analýzu se využívá komerčně dostupný systém ACQUITY QDa Detector spolu s Empower softwarem k automatizovanému zpracování dat.
Peptidová mapa vznikla trypsinovým štěpením redukovaného a alkylovaného trastuzumabu; vzorek se separoval na kolonce ACQUITY UPLC Peptide CSH C18 při 65 °C gradientem acetonitrilu a vody s formiovou kyselinou. Jako detektory sloužily ACQUITY UPLC Tunable UV (215 nm) a QDa s ESI ionizací v režimu pozitivním. Empower 3 CDS umožňuje vytvářet derived channels a vyhodnocovat extrahované iontové chromatogramy (XIC) a SIR kanály.
Pomocí derived channels Empower byly extrahovány a identifikovány šest CDR peptidů charakteristických pro trastuzumab, což potvrdilo identitu vzorku. Oxidované a deamidované formy peptidů se kvantitativně sledovaly obdobně: oxidace díky výrazné hmotnostní změně přímo v derived channel, deamidace pomocí přepínacího m/z v závislosti na retenčním čase. Pro nízkomolekulární glykopeptidy (G0F, G1F, G2F, G0, Man5) byla použita metoda Selected Ion Recording pro vyšší citlivost a spolehlivé kvantifikace. Empower umožnil automatické sestavení zpráv s výsledky pro jednotlivé atribuce i souhrnnou prezentaci.
Popisovaná laboratorní praxe nabízí významné zkrácení doby analýzy a snížení spotřeby vzorku díky jediné akvizici pro všechny PQAs. Metoda zlepšuje sledovatelnost a auditovatelnost výsledků v souladu s regulacemi QbD a umožňuje flexibilní rozšíření na nové modifikace či jiné proteiny.
Očekává se širší implementace multiatributového sledování (MAM) v procesech vývoje a kontroly kvality bioterapeutik. Další vývoj může přinést integraci vyhodnocování postrádaných nebo neočekávaných modifikací pomocí datově-mluvních nástrojů a hlubší propojení s in-line procesními platformami. Zároveň roste význam automatizovaných workflow a validovaných datových standardů.
Studie ukazuje, že ACQUITY QDa Detector ve spojení s Empower softwarem představuje efektivní a cenově dostupné řešení pro simultánní identifikaci a kvantifikaci více kritických atributů monoklonální protilátky. Tento jednotný přístup snižuje pracovní zátěž, zjednodušuje validaci a podporuje robustnější řízení kvality.
HPLC, LC/MS, LC/SQ
ZaměřeníFarmaceutická analýza
VýrobceWaters
Souhrn
Význam tématu
V biotechnologickém průmyslu roste poptávka po metodách schopných současně sledovat více klíčových atributů biologických léčiv na molekulární úrovni. Tradiční opticky založené chromatografické testy často identifikují pouze retenci látek, nikoli jejich molekulární vlastnosti. Zavedení jednoho LC-MS postupu pro více atributů umožňuje systematicky a efektivně kontrolovat kvalitu bílkovinných terapeutik, podporovat koncept Quality by Design a zvyšovat spolehlivost procesů výroby i kontaminace.
Cíle a přehled studie / článku
Studie demonstruje proof of concept pro jeden analytický běh, který současně potvrdí identitu monoklonální protilátky trastuzumab pomocí CDR peptidů a sleduje vybrané posttranslační modifikace (deamidace, oxidace, glykosylace). Pro analýzu se využívá komerčně dostupný systém ACQUITY QDa Detector spolu s Empower softwarem k automatizovanému zpracování dat.
Použitá metodika a instrumentace
Peptidová mapa vznikla trypsinovým štěpením redukovaného a alkylovaného trastuzumabu; vzorek se separoval na kolonce ACQUITY UPLC Peptide CSH C18 při 65 °C gradientem acetonitrilu a vody s formiovou kyselinou. Jako detektory sloužily ACQUITY UPLC Tunable UV (215 nm) a QDa s ESI ionizací v režimu pozitivním. Empower 3 CDS umožňuje vytvářet derived channels a vyhodnocovat extrahované iontové chromatogramy (XIC) a SIR kanály.
- ACQUITY UPLC H-Class Bio System
- ACQUITY UPLC Tunable UV Detector
- ACQUITY QDa Detector (performance model)
- ACQUITY UPLC Peptide CSH C18 Column 1.7 µm, 2.1×100 mm
- Empower 3 Chromatography Data Software
Hlavní výsledky a diskuse
Pomocí derived channels Empower byly extrahovány a identifikovány šest CDR peptidů charakteristických pro trastuzumab, což potvrdilo identitu vzorku. Oxidované a deamidované formy peptidů se kvantitativně sledovaly obdobně: oxidace díky výrazné hmotnostní změně přímo v derived channel, deamidace pomocí přepínacího m/z v závislosti na retenčním čase. Pro nízkomolekulární glykopeptidy (G0F, G1F, G2F, G0, Man5) byla použita metoda Selected Ion Recording pro vyšší citlivost a spolehlivé kvantifikace. Empower umožnil automatické sestavení zpráv s výsledky pro jednotlivé atribuce i souhrnnou prezentaci.
Přínosy a praktické využití metody
Popisovaná laboratorní praxe nabízí významné zkrácení doby analýzy a snížení spotřeby vzorku díky jediné akvizici pro všechny PQAs. Metoda zlepšuje sledovatelnost a auditovatelnost výsledků v souladu s regulacemi QbD a umožňuje flexibilní rozšíření na nové modifikace či jiné proteiny.
Budoucí trendy a možnosti využití
Očekává se širší implementace multiatributového sledování (MAM) v procesech vývoje a kontroly kvality bioterapeutik. Další vývoj může přinést integraci vyhodnocování postrádaných nebo neočekávaných modifikací pomocí datově-mluvních nástrojů a hlubší propojení s in-line procesními platformami. Zároveň roste význam automatizovaných workflow a validovaných datových standardů.
Závěr
Studie ukazuje, že ACQUITY QDa Detector ve spojení s Empower softwarem představuje efektivní a cenově dostupné řešení pro simultánní identifikaci a kvantifikaci více kritických atributů monoklonální protilátky. Tento jednotný přístup snižuje pracovní zátěž, zjednodušuje validaci a podporuje robustnější řízení kvality.
Reference
- Arnaud CH Mass Spec Weighs in on Protein Therapeutics CEN 2016 94(22) 30–34
- FDA Analytical Procedures and Methods Validation for Drugs and Biologics 2015
- ICH Q8-Q12 přístup listopad 2016
- Zhang J et al Development and Validation of a Peptide Mapping Method for the Characterization of Adalimumab with QDa Detector Chromatographia 2016 79(7) 395–403
- Birdsall RE McCarthy SM Increasing Specificity and Sensitivity in Routine Peptide Analyses Using Mass Detection with the ACQUITY QDa Detector 2015 720005377en
- Haberger M et al Assessment of Chemical Modifications of Sites in the CDRs of Recombinant Antibodies Susceptibility vs Functionality of Critical Quality Attributes mAbs 2014 6(2) 327–339
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Multi-Attribute Methods for Biopharmaceutical Analysis
2022|Waters|Příručky
[ APPLICATION NOTEBOOK ] Multi-Attribute Methods for Biopharmaceutical Analysis Application Notes [ APPLICATION NOTEBOOK ] Introduction The adoption of LC-MS-based multi-attribute method (MAM) analysis for routine monitoring of biotherapeutic variation has progressed greatly over the last five years. The ability…
Klíčová slova
notebook, notebookattribute, attributebiopharmaceutical, biopharmaceuticalreturn, returnmulti, multimam, mamcontents, contentsapplication, applicationpeptide, peptideattributes, attributesmethods, methodsacquity, acquitymab, mabbioaccord, bioaccordmonitoring
Waters ACQUITY QDa Detector - QC APPLICATIONS COMPENDIUM - EDITION 2
2018|Waters|Příručky
[ APPLICATION NOTEBOOK ] ACQUITY QDa Detector QC APPLICATIONS COMPENDIUM EDITION 2 Dear Colleague The 2013 introduction of the ACQUITY™ QDa™ Detector was a breakthrough in Chromatography and Mass Spectrometry integration. It was the fulfilment of a vision 20 years…
Klíčová slova
acquity, acquityqda, qdauplc, uplcdetector, detectormass, massarc, arcdetection, detectionbound, boundcetrimonium, cetrimoniumusing, usingminutes, minuteswaters, watersintensity, intensityclass, classanalysis
Increasing Specificity and Sensitivity in Routine Peptide Analyses Using Mass Detection with the ACQUITY QDa Detector
2015|Waters|Aplikace
Increasing Specificity and Sensitivity in Routine Peptide Analyses Using Mass Detection with the ACQUITY QDa Detector Robert E. Birdsall and Sean M. McCarthy Waters Corporation, Milford, MA, USA A P P L I C AT I O N B E…
Klíčová slova
acquity, acquityqda, qdapeptide, peptidespecificity, specificitydetector, detectorroutine, routinechannel, channelinter, interanalyses, analysesuplc, uplcchannels, channelsincreasing, increasingtuv, tuvusing, usingbiotherapeutic
Monitoring Product Quality Attributes of Biotherapeutics at the Peptide Level Using the Agilent InfinityLab LC/MSD XT System
2019|Agilent Technologies|Aplikace
Application Note Pharma & Biopharma Monitoring Product Quality Attributes of Biotherapeutics at the Peptide Level Using the Agilent InfinityLab LC/MSD XT System Authors Linfeng Wu, Lisa Zang, and Guannan Li Agilent Technologies, Inc. Abstract Single quadrupole (SQ) LC/MS has been…
Klíčová slova
cdr, cdrnistmab, nistmabpqas, pqasattributes, attributesinfinitylab, infinitylabopenlab, openlabstress, stressdeamidation, deamidationmsd, msdchemstation, chemstationoxidation, oxidationdeamidated, deamidatedpeptide, peptidemonitoring, monitoringtkpreeqynstyr
