The Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS: Peptide Quantitation Performance
Technické články | 2016 | Agilent TechnologiesInstrumentace
Analytická kvantifikace peptidů v biologických vzorcích je klíčová pro ověřování biomarkerů a klinické proteomiky. Nízké koncentrace cílových peptidů a složitost matric vyžadují vysoce citlivé a reprodukovatelné metody založené na MRM
Popis výkonu Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS pro kvantifikaci peptidů s využitím syntetického standardu LVNEVTEFAK v režimech standardního a nanoflow. Hodnocena byla citlivost, dynamický rozsah, robustnost a praktická kvantitativní přesnost na reálných vzorcích i v rámci soutěže MRM Protein Quantitation 2014
Pro standardní flow:
Systém dosáhl LLOQ 5 amol (standard) a 500 zmol (nano) s lineárním rozsahem 5 amol–5 pmol (R²=0.998) a 500 zmol–100 fmol (R²=0.99996). Retenční časy byly vysoce reprodukovatelné (RSD <0.2 % standard, <1.4 % nano). Plošné integrály měly nízkou variabilitu. Robustnost prokázána 853 injekcemi plasmatického digestu bez čištění nebo ladění (RSD 6–15 %). V soutěži MRM quantitation systém dosáhl průměrné přesnosti 95.3 % ve standard flow a 93.9 % v nanoflow
Metoda umožňuje spolehlivou analýzu nízkokoncentrovaných peptidů v biologických matricích. Díky vysoké citlivosti a robustnosti podporuje vysokopropustné studie biomarkerů, klinický výzkum, QA/QC a průmyslovou analytiku
Očekává se další rozvoj micro- a nanoflow technologií, širší nasazení HPLC-Chip systémů, integrace stabilně izotopových standardů s automatizovanou přípravou vzorků a využití pokročilé datové analýzy včetně umělé inteligence pro zpracování masivních objemů dat
Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS nabízí bezkonkurenční kombinaci citlivosti, lineárního rozsahu, reprodukovatelnosti a robustnosti pro kvantifikaci peptidů v biologických vzorcích. Metoda je vhodná pro translaci výzkumu, klinické studie i rutinní průmyslovou analytiku
LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
ZaměřeníProteomika
VýrobceAgilent Technologies
Souhrn
Význam tématu
Analytická kvantifikace peptidů v biologických vzorcích je klíčová pro ověřování biomarkerů a klinické proteomiky. Nízké koncentrace cílových peptidů a složitost matric vyžadují vysoce citlivé a reprodukovatelné metody založené na MRM
Cíle a přehled studie / článku
Popis výkonu Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS pro kvantifikaci peptidů s využitím syntetického standardu LVNEVTEFAK v režimech standardního a nanoflow. Hodnocena byla citlivost, dynamický rozsah, robustnost a praktická kvantitativní přesnost na reálných vzorcích i v rámci soutěže MRM Protein Quantitation 2014
Použitá metodika a instrumentace
Pro standardní flow:
- Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS se dual-stage iFunnel technologií a Agilent Jet Stream ionizací
- Agilent 1290 Infinity Binary LC systém
- Kolona ZORBAX RRHD 300SB-C18, 2.1×50 mm, 1.8 µm
- Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS s 1260 Infinity HPLC-Chip/MS systémem
- Polaris-HR-Chip-3C18, 20min běh v MRM/DMRM režimu
Hlavní výsledky a diskuse
Systém dosáhl LLOQ 5 amol (standard) a 500 zmol (nano) s lineárním rozsahem 5 amol–5 pmol (R²=0.998) a 500 zmol–100 fmol (R²=0.99996). Retenční časy byly vysoce reprodukovatelné (RSD <0.2 % standard, <1.4 % nano). Plošné integrály měly nízkou variabilitu. Robustnost prokázána 853 injekcemi plasmatického digestu bez čištění nebo ladění (RSD 6–15 %). V soutěži MRM quantitation systém dosáhl průměrné přesnosti 95.3 % ve standard flow a 93.9 % v nanoflow
Přínosy a praktické využití metody
Metoda umožňuje spolehlivou analýzu nízkokoncentrovaných peptidů v biologických matricích. Díky vysoké citlivosti a robustnosti podporuje vysokopropustné studie biomarkerů, klinický výzkum, QA/QC a průmyslovou analytiku
Budoucí trendy a možnosti využití
Očekává se další rozvoj micro- a nanoflow technologií, širší nasazení HPLC-Chip systémů, integrace stabilně izotopových standardů s automatizovanou přípravou vzorků a využití pokročilé datové analýzy včetně umělé inteligence pro zpracování masivních objemů dat
Závěr
Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS nabízí bezkonkurenční kombinaci citlivosti, lineárního rozsahu, reprodukovatelnosti a robustnosti pro kvantifikaci peptidů v biologických vzorcích. Metoda je vhodná pro translaci výzkumu, klinické studie i rutinní průmyslovou analytiku
Reference
- Agilent Technologies. Technical Overview: Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS – Peptide Quantitation Performance. USA, 2016, 5991-6898EN
- Proceedings of Mikromethoden in der Proteinchemie Meeting, 2014
- University of Victoria – Genome BC Proteomics Centre. MRM Protein Quantitation Contest, 2014
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Jet Stream Proteomics for Sensitive and Robust Standard Flow LC/MS
2015|Agilent Technologies|Technické články
Jet Stream Proteomics for Sensitive and Robust Standard Flow LC/MS Technical Overview Authors Introduction Yanan Yang, Vadiraj Bhat, and Proteomics research has typically used nanospray LC/MS to achieve maximum sensitivity when the sample amount is limited. Nanoflow LC/MS takes advantage…
Klíčová slova
jet, jetstream, streamflow, flowsensitivity, sensitivityproteomics, proteomicscounts, countsproteins, proteinspeptides, peptidesnanoflow, nanoflowifunnel, ifunnelagilent, agilentefficiency, efficiencyfunnel, funnelworkflows, workflowstechnology
Robust and Reproducible Protein Quantification in Plasma using the Evosep One and the Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS
2020|Agilent Technologies|Aplikace
Application Note Proteomics Robust and Reproducible Protein Quantification in Plasma using the Evosep One and the Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS Authors Linfeng Wu Agilent Technologies, Inc., Santa Clara, CA, USA Nicolai Bache and Dorte B. Bekker-Jensen Evosep Biosystems, Odense,…
Klíčová slova
robustness, robustnessevosep, evosepplasma, plasmapeptide, peptidesis, sisamol, amolmrm, mrmhuman, humantest, testprotein, proteintargeted, targetedcolumn, columndigest, digestquantification, quantificationbefore
Peptide Quantification in Plasma Using the Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS Coupled with the Agilent 1290 Infinity II LC System
2020|Agilent Technologies|Aplikace
Application Note Proteomics Peptide Quantification in Plasma Using the Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS Coupled with the Agilent 1290 Infinity II LC System Author Linfeng Wu Agilent Technologies, Inc. Abstract This application note showcases the quantitative performance of multiple reaction…
Klíčová slova
sis, sispeptide, peptidecounts, countspeptides, peptidesacquisition, acquisitionplasma, plasmatime, timequantitative, quantitativemin, minmrm, mrmsgipivtspyqihftk, sgipivtspyqihftkquantification, quantificationlloq, lloqhuman, humanaflltpr
High Sensitivity Peptide Analysis Using the 6550 Q-TOF with iFunnel Technology
2011|Agilent Technologies|Aplikace
High Sensitivity Peptide Analysis Using the 6550 Q-TOF with iFunnel Technology Application Note Authors Introduction Christine A. Miller, Keith Waddell, Patrick Perkins, and Christian Klein Agilent Technologies, Inc. Santa Clara, CA USA Sensitivity is a key requirement for peptide analysis…
Klíčová slova
peptides, peptidesifunnel, ifunnelcoverage, coveragepeptide, peptidetrypsinized, trypsinizedsensitivity, sensitivityunique, uniqueslvnevtefak, slvnevtefakprotein, proteintof, tofnanoflow, nanoflowamol, amoltechnology, technologyserum, serumidentification
