Drug-to-Antibody Ratio (DAR) Calculation of Antibody-Drug Conjugates (ADCs)
Aplikace | 2016 | Agilent TechnologiesInstrumentace
Antibody–drug conjugáty (ADC) představují pokročilou skupinu bioterapeutik, která kombinují specifické monoklonální protilátky s vysoce účinnými cytotoxickými látkami. Měření poměru počtu navázaných léčiv (DAR) je klíčové pro optimalizaci účinnosti, farmakokinetiky i bezpečnostního profilu ADC.
Cílem aplikacni note bylo ukázat rychlou a reprodukovatelnou metodu pro stanovení DAR u ADC využitim automatizovaného vzorkovych pripravy a pokrocile LC/MS analýzy. Porovnány byly ctyri stavy vzorku (intaktni nebo redukovane a s/bez deglykozylace) v osmi replikatech.
Vzorky ADC byly pripraveny na automatickem pracovisti AssayMAP Bravo s reagentem rapid PNGase F pro vysokoce rychlou deglykozylaci a DTT pro redukci disulfidickych vazeb. Pro chromatografii a hmotnostni spektrometrii byla použita sestava:
Intaktni glykozylovane ADC vykázaly prumerny DAR 3.6 (%CV=0), po deglykozylaci se hodnota zvyšila na 3.88 (%CV=1.1). U redukovanych vzorku byly prumerne hodnoty DAR 3.23 (%CV=2.2) pro glykozylovane a 3.21 (%CV=2.6) pro deglykozylovane. Automatizace pripravy snížila variabilitu, zvysila citlivost zvlast pri analyzech lehkeho retezce a urychlila prubeh na mene nez hodinu.
Automatizovane platforma nabizi vysokou reprodukovatelnost, minimalizuje riziko lidske chyby, umoznuje paralelni pripravu 8–96 vzorku a zkracuje casovou narocnost pripravy. Kombinace s vysoce rezolucním LC/MS pristrojem a pokrocilou analytickou softwarovou platformou zjednodusuje a zrychluje ziskani presneho DAR.
Ocekava se dalsi rozsireni automatizace pripravy pro vyssi propustnost a integrace s platformami pro vyssi urovne multiplexni analýzy. Vylepšení algoritmu dekonvoluce a softwaru muze zajistit detailnejsi rozliseni glykoformnich struktury a modifikaci retezcu.
Prezentovana metoda spojuje automatizovanou vzorkovou pripravu s rychlou deglykozylaci, optimalni chromatografii a presnou LC/MS analýzu pro efektivni a reprodukovatelne stanovení DAR ADC. Tento pristup usnadní vývoj a kontrolu kvality ADC v rozsahlejsich farmaceutickych bytech.
Příprava vzorků, Software, LC/TOF, LC/HRMS, LC/MS, LC/MS/MS
ZaměřeníFarmaceutická analýza
VýrobceAgilent Technologies
Souhrn
Význam tématu
Antibody–drug conjugáty (ADC) představují pokročilou skupinu bioterapeutik, která kombinují specifické monoklonální protilátky s vysoce účinnými cytotoxickými látkami. Měření poměru počtu navázaných léčiv (DAR) je klíčové pro optimalizaci účinnosti, farmakokinetiky i bezpečnostního profilu ADC.
Cíle a přehled studie
Cílem aplikacni note bylo ukázat rychlou a reprodukovatelnou metodu pro stanovení DAR u ADC využitim automatizovaného vzorkovych pripravy a pokrocile LC/MS analýzy. Porovnány byly ctyri stavy vzorku (intaktni nebo redukovane a s/bez deglykozylace) v osmi replikatech.
Použitá metodika a instrumentace
Vzorky ADC byly pripraveny na automatickem pracovisti AssayMAP Bravo s reagentem rapid PNGase F pro vysokoce rychlou deglykozylaci a DTT pro redukci disulfidickych vazeb. Pro chromatografii a hmotnostni spektrometrii byla použita sestava:
- Agilent 1290 Infinity UHPLC s kolonkou PLRP-S (1000 Å, 2.1×150 mm, 8 µm)
- Agilent 6550 iFunnel Q-TOF se zdrojem Dual Jet Stream ESI
- Software Agilent MassHunter Qualitative Analysis s BioConfirm a DAR Calculator
Hlavní výsledky a diskuse
Intaktni glykozylovane ADC vykázaly prumerny DAR 3.6 (%CV=0), po deglykozylaci se hodnota zvyšila na 3.88 (%CV=1.1). U redukovanych vzorku byly prumerne hodnoty DAR 3.23 (%CV=2.2) pro glykozylovane a 3.21 (%CV=2.6) pro deglykozylovane. Automatizace pripravy snížila variabilitu, zvysila citlivost zvlast pri analyzech lehkeho retezce a urychlila prubeh na mene nez hodinu.
Přínosy a praktické využití metody
Automatizovane platforma nabizi vysokou reprodukovatelnost, minimalizuje riziko lidske chyby, umoznuje paralelni pripravu 8–96 vzorku a zkracuje casovou narocnost pripravy. Kombinace s vysoce rezolucním LC/MS pristrojem a pokrocilou analytickou softwarovou platformou zjednodusuje a zrychluje ziskani presneho DAR.
Budoucí trendy a možnosti využití
Ocekava se dalsi rozsireni automatizace pripravy pro vyssi propustnost a integrace s platformami pro vyssi urovne multiplexni analýzy. Vylepšení algoritmu dekonvoluce a softwaru muze zajistit detailnejsi rozliseni glykoformnich struktury a modifikaci retezcu.
Závěr
Prezentovana metoda spojuje automatizovanou vzorkovou pripravu s rychlou deglykozylaci, optimalni chromatografii a presnou LC/MS analýzu pro efektivni a reprodukovatelne stanovení DAR ADC. Tento pristup usnadní vývoj a kontrolu kvality ADC v rozsahlejsich farmaceutickych bytech.
Reference
- Perez H L et al. Antibody-drug conjugates: current status and future directions. Drug Discovery Today 2014, 19(7), 869-881.
- Basa L. Drug-to-Antibody Ratio (DAR) and Drug Load Distribution by LC-ESI-MS. In: Antibody Drug Conjugates. Methods in Molecular Biology 1045, Humana Press 2013, 285-293.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
An Integrated Workflow for Automated Calculation of Antibody‑Drug Conjugate (ADC) Drug‑to-Antibody Ratio (DAR)
2016|Agilent Technologies|Aplikace
An Integrated Workflow for Automated Calculation of Antibody‑Drug Conjugate (ADC) Drug‑to-Antibody Ratio (DAR) Using Automated Sample Preparation, Agilent MassHunter Walkup, and Agilent MassHunter BioConfirm DAR Calculator Software Application Note Biotherapeutics and Biosimilars Authors Abstract David L. Wong, Tanner Stevenson, and…
Klíčová slova
dar, daradc, adcdeconvoluted, deconvoluteddeglycosylated, deglycosylatedintact, intactreduced, reducedadcs, adcsantibody, antibodybioconfirm, bioconfirmdrug, drugassaymap, assaymapglycosylated, glycosylatedcalculator, calculatorcounts, countsbravo
Analysis of Antibody Drug Conjugate Through the Characterization of Drug Antibody Ratios
2015|Agilent Technologies|Aplikace
Analysis of Antibody Drug Conjugate Through the Characterization of Drug Antibody Ratios Using an Agilent 1290 Infinity Binary LC System Coupled to an Agilent 6550 iFunnel Q-TOF Application Note Biopharma Authors Introduction Ravindra Gudihal and Jing Chen Antibody drug conjugates…
Klíčová slova
dar, dardeconvoluted, deconvolutedadc, adcadcs, adcschain, chainintact, intactspectrum, spectrumdeglycosylated, deglycosylatedcounts, countsgiven, givenreduced, reducedmass, massheavy, heavydrug, drugbioconfirm
Determination of Drug-to-Antibody Ratio for Antibody-Drug Conjugates Purified from Serum
2016|Agilent Technologies|Aplikace
Determination of Drug-to-Antibody Ratio for Antibody-Drug Conjugates Purified from Serum Using Automated Affinity Purification, LC/MS analysis, and Novel DAR Calculation Software Application Note Authors Introduction Jing Chen, Michael Bovee, and Antibody-drug conjugates (ADCs) are an emerging class of biotherapeutics designed…
Klíčová slova
adc, adcaffinity, affinityserum, serumdar, darpurified, purifiedassaymap, assaymapdeconvoluted, deconvolutedadcs, adcscounts, countspurification, purificationbravo, bravocartridges, cartridgescommercially, commerciallyantigen, antigencopurified
A streamlined drug-to-antibody ratio determination workflow for intact and deglycosylated antibody-drug conjugates
2019|Agilent Technologies|Aplikace
Application Note Pharma and Biopharma A streamlined drug-to-antibody ratio determination workflow for intact and deglycosylated antibody-drug conjugates Using the Agilent AssayMAP Bravo and Agilent 6545XT AdvanceBio accurate-mass quadrupole time-of-flight LC/MS system Authors Jerry Han, Zach Van Den Heuvel, and Steve…
Klíčová slova
deglycosylation, deglycosylationaffinity, affinityassaymap, assaymapadc, adccartridges, cartridgesdar, daradcs, adcscartridge, cartridgestreptavidin, streptavidinpurified, purifiedserum, serumantibody, antibodywere, werepurification, purificationsulfo
