Automated High Throughput Sample Preparation and UPLC-MS/MS Analysis for the Quantification of EtG and EtS in Human Urine Using the Andrew+ Pipetting Robot

Význam tématu

Biomarkery ethylglukuronid (EtG) a ethylsulfát (EtS) jsou klíčovými ukazateli recentní konzumace alkoholu s detekčním oknem až 80 hodin po požití. Jejich spolehlivá identifikace a kvantifikace hrají významnou roli ve forenzní toxikologii, klinických studiích a monitoringu závislostí.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout a ověřit vysoce automatizovanou metodiku vzorkové přípravy ve formátu „dilute and shoot“ pro stanovení EtG a EtS v lidské moči. Práce demonstruje využití robota Andrew+ s ovládáním přes cloudový software OneLab a následnou analýzu na UPLC–MS/MS.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda vychází z jednoduchého ředění vzorků s interním standardem a přímé injekce do UPLC–MS/MS. Robot Andrew+ provádí pipetování, míchání buď pipetou, nebo pomocí Microplate Shaker+, a distribuci vzorků do 96destičkového formátu. Analytická část využívá:

• ACQUITY UPLC I-Class FTN
• Xevo TQD Triple Quadrupole Mass Spectrometer
• ACQUITY UPLC CSH Phenyl-Hexyl Column (1,7 µm, 2,1 × 150 mm)
• OneLab software pro řízení protokolů
• Andrew+ Pipetting Robot a Microplate Shaker+

Hlavní výsledky a diskuse

Automatizované protokoly (pipetové míchání vs. shaker) prokázaly reprodukovatelnost a přesnost srovnatelnou s manuální přípravou. Precision (RSD) pro EtG (200, 500 ng/mL) a EtS (800, 2000 ng/mL) byla v požadovaných limitech. Obnova analyzovaných QC vzorků se pohybovala v rozmezí ±2 % oproti manuální přípravě. Optimalizace parametrů pipetování v OneLab vedla ke zvýšení konzistence míchání a zkrácení doby přípravy.

Přínosy a praktické využití metody

• Zvýšení throughput díky 96destičkovému formátu
• Redukce chyb způsobených lidským faktorem
• Volné kapacity analytika pro jiné úkoly
• Rychlé přenesení a úprava protokolů v cloudovém prostředí OneLab
• Možnost výběru míchání pipetou nebo shakerem dle potřeby laboratoře

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozšíření automatizace vzorkové přípravy pro další biomarkery v klinické a forenzní toxikologii. Integrace s LIMS pro plně bezobslužný provoz, validace pro další biologické matrice a optimalizace analytických parametrů pro vyšší citlivost.

Závěr

Využití robota Andrew+ a OneLab software umožňuje spolehlivou automatizovanou přípravu vzorků „dilute and shoot“ pro EtG a EtS srovnatelnou s manuálními postupy. Metoda přináší vyšší efektivitu, reproducibilitu a snížení rizika chyb.

Reference

1. Ohouo P.Y.; Dixon N.; Lieu A.; Zavery Z.; Rosano T.G. UPLC-MS/MS Method for Quantitation of EtG and EtS in Human Urine. Waters Application Note 720006273, May 2018.