Agilent Bio-Monolith Protein A and Protein G Affinity Columns

Význam tématu

Stanovení titrů monoklonálních protilátek (mAb) je zásadní pro vývoj ekonomicky efektivních bioprocesů. Včasná a přesná kvantifikace usnadňuje výběr nejvhodnější buněčné linie, optimalizaci fermentačních podmínek a načasování sklizně. Affinitní kolony Bio-Monolith Protein A a Protein G od Agilent Technologies nabízejí vysokou selektivitu, kapacitu a reprodukovatelnost, čímž zkracují dobu vývoje metod a zvyšují výtěžnost.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo demonstrovat schopnosti monolitních Protein A a Protein G kolon pro rychlou kvantifikaci a purifikaci mAb v různých fázích bioprocesu. Studie se zaměřila na linearitu stanovení titrů, specifickou kapacitu i dlouhodobou stabilitu během stovek i tisíců cyklů. Ukázaly se výhody při separaci z komplexních matric, jako jsou kultivační supernatanty i lidská plazma.

Použitá metodika a instrumentace

Byly využity monolitní afinitní kolony:

• Agilent Bio-Monolith Protein A, rozměr 4,95 × 5,2 mm
• Agilent Bio-Monolith Protein G, rozměr 4,95 × 5,2 mm

Pro chromatografii byl použit systém Agilent 1200 Infinity LC. Analýzy probíhaly při UV detekci na 280 nm. Pro kvantifikaci mAb byly aplikovány lineární kalibrace v rozsahu od 0,02 do 0,5 mg/mL.

Hlavní výsledky a diskuse

Lineární vztah mezi koncentrací IgG1 a absorpcí byl prokázán s koeficientem R2 = 0,9999 v rozsahu běžných titer CHO buněk. Protein A kolona selektivně zachytila IgG1 z Escherichia coli lyzátu i lidské plazmy s elucí při 1,5 min. Protein G kolona rozšířila selektivitu na další podtřídy IgG. Životnost kolon byla demonstrována více než 1000 cykly vazby a elučního kroku pro IgG3 s minimální změnou plochy píku.

Přínosy a praktické využití metody

Monolitní kolony umožňují rychlé separace (čas jedné analýzy do 3 min), vysokou kapacitu a minimální ucpávání při zpracování komplexních vzorků. Výsledkem je úspora času i nákladů na vývoj metod a náhrada tradičních afinitních matric v procesu vývoje a produkce mAb. Metoda dále usnadňuje výběr optimálních podmínek fermentace a načasování sklizně.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj směřuje k integraci s vysokopropustnými LC/MS systémy pro podrobnou charakterizaci mAb a kontrolu kvality. Rozšíření aplikací na další imunoglobulinové třídy a posttranslační modifikace poskytne širší spektrum využití v biopharmaceutickém výzkumu i v diagnostice. Zvýšení automatizace a miniaturizace monolitních kolon podpoří nasazení v online monitoringu výrobních sérií.

Závěr

Agilent Bio-Monolith Protein A a Protein G afinitní kolony představují efektivní nástroj pro rychlou a přesnou kvantifikaci mAb titerů a purifikaci z různých matric. Díky vysoké selektivitě, kapacitě a životnosti podporují optimalizaci bioprocesů i zvýšení ekonomické efektivity výroby.

Reference

• Agilent Technologies, Inc., Agilent Bio-Monolith Protein A and Protein G Affinity Columns, Application Note 5991-5961EN, 2015.