Detection and Accurate Quantitation of 14 Water Soluble Vitamins and 14 Fat Soluble Vitamins in Supplements by LC-MS/MS Triple Quadrupole

Význam tématu

Vitaminy skupin vodou rozpustných B a tukem rozpustných A, D, E a K hrají klíčovou roli v lidském metabolismu a prevenci onemocnění. Přesné stanovení jejich obsahu ve výživových doplňcích je nezbytné pro zajištění kvality, bezpečnosti spotřebitelů a splnění regulačních požadavků.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout a ověřit dvě rychlé a citlivé metody LC-MS/MS pro simultánní kvantifikaci 14 vodou rozpustných B vitaminů a 14 tukem rozpustných vitaminů ve formě komerčních doplňků stravy. Studie demonstrovala vhodnost metod pro rutinní kontrolu kvality a stanovení nutriční deklarace.

Použitá metodika

Pro oba typy vitamínů byla zvolena separace na UHPLC kolonně s vhodným složením mobilních fází (ammonium formiát s kyselinou mravenčí pro vodou rozpustné, kyselina mravenčí v methanolu pro tukem rozpustné). K detekci posloužil AJS ESI pozitivní režim v módu Dynamic MRM s dvojicí časových oken stop time 6,5 min pro vodou rozpustné a 9,5 min pro tukem rozpustné vitaminy.

Odběr vzorku a příprava:

• Vodou rozpustné vitaminy – extrakce kyselinou fosforečnou, acetonitrilem, EDTA a askorbátem, ohřev při 90–95 °C, následné naředění.
• Tukem rozpustné vitaminy – extrakce DMSO při 55–65 °C, přídavek ethanolu, homogenizace, naředění.

Validace zahrnovala použití matricově matovaných standardů, standard-addition a interních standardů. Akceptační kritéria: r2 ≥ 0,99, shoda iontových poměrů a retencí a post-spike recovery 70–130 %.

Použitá instrumentace

• UHPLC Agilent 1290 Infinity II
• Kolony Poroshell 120 Phenyl-Hexyl 3,0×100 mm (vodou rozpustné) a Poroshell 120 SB-AQ 2,1×150 mm (tukem rozpustné)
• Triple-Quadrupole LC/MS Agilent 6470

Hlavní výsledky a diskuse

Metody prokázaly výbornou linearitu (0,5–500 ng/mL) a nízké meze detekce. Test multivitamínových tablet potvrdil hodnoty jednotlivých vitaminů v souladu s deklarovaným obsahem. Post-spike recovery se pohybovalo mezi 94,7 a 115 % u vodou rozpustných a 86,6 až 106 % u tukem rozpustných vitaminů. Matrixové efekty byly úspěšně kompenzovány interními standardy a standard addition přístupem.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a robustní analýza více vitamínů v jediném běhu.
• Vysoká reprodukovatelnost a přesnost díky interním standardům a validaci v reálné matrici.
• Úspora času a nákladů oproti klasickým separátním metodám.
• Možnost aplikace v kontrolních laboratořích potravinářských i farmaceutických výrobců.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj se zaměří na plnou automatizaci vzorkování, optimalizaci kolonnových fází pro širší spektrum vitamínů a karotenoidů, zavádění ambientních ionizačních technik a rozšíření metodik na komplexní potravinové matrixy či biologické vzorky.

Závěr

Popsané LC-MS/MS metody umožňují simultánní, přesné a citlivé stanovení 28 vitaminů v doplňcích stravy. Vysoká validita a jednoduchá příprava vzorků podporují jejich využití v rutinní kontrole kvality a zpracování nutričních dat.

Reference

Hui Zhao; Detection and Accurate Quantitation of 14 Water Soluble Vitamins and 14 Fat Soluble Vitamins in Supplements by LC-MS/MS Triple-Quadrupole; Poster ASMS 2021, FP190