Agilent Bio-Monolith Protein A, rProtein A, and Protein G Columns

Význam tématu

Affinity chromatografie na bázi Protein A, rProtein A a Protein G představuje klíčovou techniku pro rychlou a selektivní purifikaci imunoglobulinů z biologických vzorků. Monolitické sloupce umožňují vysoké průtoky a opakované použití s minimálním rizikem ucpání či degradace, což je zásadní pro biotechnologické procesy a analytické laboratoře.

Cíle a přehled studie / článku

Tento datový list popisuje charakteristiky a podmínky dodání Agilent Bio-Monolith Protein A, rProtein A a Protein G sloupců. Dokument poskytuje doporučení pro přípravu, provozní podmínky, čištění a skladování, aby byla zajištěna maximální životnost sloupců a reprodukovatelné výsledky.

Použitá metodika a instrumentace

Monolitické sloupce jsou vyrobeny z poly(glycidyl methylmethakrylát-co-ethylene dimethakrylátu) se všechnutředněporézní strukturou.

• Imobilizovaný ligand: Protein A z S. aureus, rProtein A z E. coli, rProtein G z E. coli
• Rozměry: průměr 5,2 mm × délka 4,95 mm, objem náplně 0,10 mL
• Kompatibilita: HPLC a preparativní LC systémy
• Provozní teplota: 4–40 °C, skladování 4–8 °C
• Pracovní pH: 2–11, CIP až pH 13

Hlavní výsledky a diskuse

Testy prokázaly dynamickou vazebnou kapacitu (hIgG 0,5 mg/mL, PBS pH 7,4, 1 mL/min): Protein A >8 mg/mL, rProtein A >5 mg/mL, Protein G >9 mg/mL. Doporučené průtoky jsou 0,2–2 mL/min (max. 3 mL/min) při tlaku do 150 bar. Pro optimální výkon se využívá pH 7,4 a 50 mM likvidačních pufrů, případně NaCl do 0,2 M pro lepší tvar špičky.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlou purifikaci IgG z fermentačních supernatantů a lyzátů s vysokou selektivitou a výtěžností. Monolitická struktura snižuje riziko ucpání a prodlužuje životnost sloupce. Pro pravidelné čistění se doporučuje CIP s 0,1 M NaOH a následné vyrovnání pH.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další vývoj v oblasti ligandů s vyšší afinitou, nové monolitické materiály a integrace do kontinuálních procesů. Kombinace s online detekcí a automatizovanou úpravou pufrů může zvýšit efektivitu a reprodukovatelnost. Rozšíření aplikací na jiné třídy biomolekul je perspektivní pro bioprocesní inženýrství.

Závěr

Agilent Bio-Monolith Protein A, rProtein A a Protein G sloupce nabízejí robustní a vysoce výkonnou platformu pro purifikaci imunoglobulinů. Dodržování doporučených podmínek zajišťuje dlouhodobou stabilitu, vysokou kapacitu a kvalitní separaci imunoglobulinů pro různé biotechnologické aplikace.