Determination of Methylcafestol in Roasted Coffee Products According to DIN 10779

Význam tématu

Stanovení obsahu 16-O-methylcafestolu je klíčové pro ověření pravosti a kvality pražených kávových produktů. Tato látka ovlivňuje zdravotní vlastnosti kávy a její množství závisí na technologii pražení.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout a ověřit HPLC metodu dle normy DIN 10779 pro kvantifikaci 16-O-methylcafestolu v pražené kávě. Studie zahrnovala přípravu vzorků, kalibraci, hodnocení linearity, přesnosti, opakovatelnosti a carryover.

Použitá metodika a instrumentace

Pro analýzu byla použita sestava Agilent 1260 Infinity LC s diode array detektorem. Kolony:

• ZORBAX Eclipse Plus C18, 4,6×150 mm, 5 µm
• Poroshell 120 EC-C18, 3,0×150 mm, 2,7 µm (solvent saver)
• Poroshell 120 EC-C18, 3,0×50 mm, 2,7 µm pro zrychlenou separaci

Metoda: izokratická eluce 50 % acetonitrilu, detekce na 220 nm, průtok 1,0 mL/min (sloupek 1), 0,43–1,72 mL/min na sloupcích 2 a 3. Objem injekce 20 µL (sloupek 1), 8,6 µL a 2,8 µL na sloupcích 2 a 3. Příprava vzorku: extrakce Soxhletovou metodou s tert-butylmetyletherem, saponifikace v KOH/etanolu, extrakce, suspenze v methylenchloridu a konečná přímá injekce po filtraci.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje v rozsahu 0,781–100 mg/L vynikající linearity (R²>0,9999). LOD je 0,12–0,17 mg/L, LOQ 0,38–0,58 mg/L. Opakovatelnost retenční doby je ≤0,2 % RSD, plochy píku ≤0,34 % RSD. Přesnost stanovení na úrovni 20 mg/L je cca 91–92 %. Na solvent saver sloupcích se podstatně snížila spotřeba elučního činidla (o 57 %) a zkrátila analýza při zachování nebo zlepšení separační účinnosti. Použití krátkého sloupce 3,0×50 mm a zvýšených průtoků umožnilo reálný čas analýzy 2,7 minuty.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda poskytuje rychlé, přesné a reprodukovatelné stanovení klíčového diterpenu v kávových výrobcích. Redukce doby a spotřeby rozpouštědel zvyšuje efektivitu laboratoře a snižuje náklady.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další zrychlení analýzy pomocí ultraHR-HPLC, automatizace přípravy vzorků a integrace s hyphenovanými metodami (LC–MS) pro širší profilaci diterpenů a kontaminantů v kávě.

Závěr

Ověřená HPLC metoda dle DIN 10779 nabízí spolehlivé stanovení 16-O-methylcafestolu v pražené kávě s vysokou citlivostí a robustností. Optimalizace kolony a provozních podmínek výrazně zlepšuje produktivitu analýzy.

Reference

1. Wikipedia. Cafestol. Dostupné online.
2. European Food Safety Authority. Scientific opinion on health claims related to coffee. EFSA Journal 2011;9(5):2057.
3. DIN 10779. Coffee and coffee products – Determination of 16-O-methylcafestol content in roasted coffee by HPLC. 2011.
4. DIN ISO 20481. Coffee and coffee products – Determination of caffeine content by HPLC. 2008.
5. Agilent Technologies. Application Note 5991-2851EN. Caffeine determination by HPLC.
6. DIN 10767. Determination of chlorogenic acids by HPLC. 1992.
7. Agilent Technologies. Application Note 5991-2852EN. Chlorogenic acids in coffee.
8. DIN EN 14132. Determination of ochratoxin A in barley and roasted coffee by HPLC with immunoaffinity clean-up. 2009.
9. Agilent Technologies. Application Note 5991-2854EN. Mycotoxin analysis in coffee.