Analysis of Testosterone Using the Xevo TQ-XS for Clinical Research

Význam tématu

Testosteron patří mezi klíčové steroidní hormony sledované v klinickém výzkumu pro svou úlohu ve fyziologii a patofyziologii. Spolehlivá a citlivá kvantifikace této látky v séru je nezbytná pro diagnostiku, monitorování léčby a výzkum endokrinních poruch. Tradiční imunochemické metody často trpí nedostatečnou specificitou a zkreslením výsledků vlivem křížových reaktivit se strukturálně podobnými steroidy.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo předvést vysokou analytickou citlivost a kvantitativní výkon hmotnostního spektrometru Xevo TQ-XS vybaveného technologií StepWave XS a XDR detektorem při stanovení testosteronu v malém objemu séra (100 µl). Studie zahrnovala ověření opakovatelnosti, linearity, přesnosti a přesnosti metody na referenčních materiálech.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky séra byly precipitovány methanolem, zředěny vodou a vyčištěny na Oasis PRiME HLB µElution destičce. Mytí probíhalo 0,1 % amoniakem v 35 % methanolu a 0,1 % kyselinou mravenčí v 35 % methanolu, vzorky byly eluovány směsí acetonitrilu a methanolu (85:15 v/v) a následně zředěny vodou. Separace probíhala na ACQUITY UPLC I-Class s kolonkou HSS T3 a VanGuard T3 pre-kolonkou za gradientu vody, methanolu, amoniaku a kyseliny mravenčí. Detekce byla provedena na Xevo TQ-XS v režimu MRM, kvantifikátor m/z 289.2 > 97.0, kvalifikátor m/z 289.2 > 109.0, interní standard testosteron-13C3 m/z 292.2 > 100.0.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala limitem detekce 5 pg/ml testosteronu (0,017 nmol/l) s RSD < 3 %. Kalibrační křivka v rozsahu 0,005–20 ng/ml dosáhla koeficientu korelace r2 > 0,999. Celková přesnost a opakovatelnost na čtyřech úrovních koncentrací (0,02–14 ng/ml) se pohybovala ≤ 4,4 %. Stanovení na evropských referenčních materiálech ERM DA345a a DA346a potvrdilo bias v rozmezí ± 3,3 %.

Přínosy a praktické využití metody

Ultracitlivá detekce testosteronu v malém objemu vzorku umožňuje minimalizovat odběry krve a rozšířit analýzu na pediatrické či vzácné pacientské soubory. Robustní postup s širokým dynamickým rozsahem je vhodný pro rutinní klinické laboratoře i farmaceutický výzkum, kde je nutná vysoká přesnost a spolehlivost výsledků.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření této platformy na multiplexní analýzu souborů steroidů a jiných biomarkerů, integrace s automatizovanými systémy pro vysokoprostorovou sériovou analýzu a aplikace v personalizované medicíně. Další vylepšení iontové optiky a detekčních systémů posunou limity citlivosti i robustnosti.

Závěr

Xevo TQ-XS prokázal vynikající analytickou citlivost, linearitu a přesnost pro stanovení testosteronu z 100 µl séra. Metoda splňuje nároky klinického výzkumu i rutinní laboratoře, nabízí minimální objem vzorku, široký dynamický rozsah a vysokou opakovatelnost měření.