LC-MS Quantification of Trastuzumab Using Pellet Digestion and ProteinWorks eXpress Direct Digest Kits
Aplikace | 2016 | WatersInstrumentace
Automatizace procesu PPT a digesce pro vysokopropustné aplikace.
Rozšíření protocolu na multiplexní stanovení více protilátek v jednom běhu.
Integrace s metodami pro studium posttranslačních modifikací a proteomické charakterizace.
Spotřební materiál, LC/MS, LC/MS/MS
ZaměřeníProteomika, Klinická analýza
VýrobceWaters
Souhrn
Význam tématu
Quantitativní stanovení monoklonálních protilátek, jako je trastuzumab, v biologických vzorcích je klíčové pro vývoj léčiv a monitorování pacientů. Vzhledem k vysoké složitosti plazmatických matric a přítomnosti rušivých bílkovin (zejména albuminu) je potřeba vyvinout citlivé, selektivní a přitom rychlé a standardizované metody pro LC-MS/MS analýzu.Cíle a přehled studie
Studie si klade za cíl ověřit kompatibilitu pelletové digesce s ProteinWorks eXpress Direct Digest kity a optimalizovat předúpravu plazmatických vzorků pomocí precipitace proteinů (PPT). Hlavním zaměřením je zlepšení citlivosti a selektivity pro kvantifikaci trastuzumabu v lidské plazmě při minimálním objemu vzorku.Použitá metodika a instrumentace
- Precipitace proteinů organickými rozpouštědly: testovány podmínky 1:1 IPA, 1:1 MeOH s 1 % TCA a 1:10 IPA s 1 % TFA.
- Pelletová digesce: resuspendace peletu a tryptické štěpení pomocí ProteinWorks eXpress Direct Digest kitu podle standardního protokolu.
- Detekce: UPLC separace následovaná tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC-MS/MS) s cílenou analýzou signature peptidů trastuzumabu a albuminu.
- Instrumentace: Waters UPLC systém a selektivní QqQ hmotnostní spektrometr.
Hlavní výsledky a diskuse
Nejefektivnější proteinovou precipitací bylo použití 1:10 IPA s 1 % TFA, které redukovalo signál albuminových peptidů o více než 90 %. Současně došlo ke 2–8násobnému zvýšení oblasti signálu tří peptidů trastuzumabu (DTYIHWVR, IYPTNGYTR, FTISADTSK) ve srovnání s přímou digescí bez PPT. Kalibrační křivky pro každý peptid vykázaly v rozsahu 5–50 µg/mL linearitu s R2 ≥ 0,99 a průměrnou přesností nad 99 %.Přínosy a praktické využití metody
Metoda kombinuje jednoduchou, rychlou a cenově nenáročnou předúpravu PPT s komerčně dostupným digesčním kitem, což umožňuje i méně zkušeným analytikům dosáhnout robustní a vysoce citlivé kvantifikace terapeutických protilátek ve studijních plazmatických vzorcích.Budoucí trendy a možnosti využití
Závěr
Kombinace pelletové digesce a ProteinWorks eXpress Direct Digest kitu po efektivní PPT předúpravě poskytuje vysoce citlivou, selektivní a reprodukovatelnou LC-MS/MS metodu pro kvantifikaci trastuzumabu v malých objemech plazmy.Reference
- Mary Lame, Paula Orens, Sherri Naughton, Erin Chambers. LC-MS Quantification of Trastuzumab Using Pellet Digestion and ProteinWorks eXpress Direct Digest Kits. Waters Corporation, 2016.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Waters Application Notes - ProteinWorks
2016|Waters|Příručky
Waters Application Notes ProteinWorks OUR SCIENTISTS Erin E. Chambers As a principal scientist, Erin has been working almost exclusively on peptide and protein bioanalysis for the last seven years, while managing small and large molecule bioanalysis and clinical research applications…
Klíčová slova
proteinworks, proteinworksdigest, digestexpress, expressarea, areapeptide, peptidekit, kittrastuzumab, trastuzumabgeneric, genericplasma, plasmaftfsldtsk, ftfsldtskdigestion, digestionmurine, murineantibody, antibodyprotein, proteindstyslsstltlsk
Antibody Quantification Using ProteinWorks eXpress Digest Kits and Multiple Plasma Volumes
2016|Waters|Aplikace
Antibody Quantification Using ProteinWorks eXpress Digest Kits and Multiple Plasma Volumes Paula Orens, Mary Lame, Sherri Naughton, and Erin Chambers Waters Corporation, Milford, MA, USA G OA L Recently there has been a trend towards LC-MS To demonstrate the broad…
Klíčová slova
area, areaplasma, plasmadigest, digestproteinworks, proteinworksexpress, expressvolumes, volumesinfliximab, infliximabdirect, directdilltqspailsvspger, dilltqspailsvspgerdigestion, digestionunfamiliar, unfamiliarquantification, quantificationpeptide, peptideconc, concadalimumab
PEPTIDE AND PROTEIN BIOANALYSIS
2016|Waters|Příručky
[ APPLICATION NOTEBOOK ] PEPTIDE AND PROTEIN BIOANALYSIS [ OUR SCIENTISTS ] Yun Alelyunas, PhD Before coming to Waters in 2012, Yun Alelyunas was a principal scientist and team leader at AstraZeneca for 20 years where she was involved in…
Klíčová slova
ionkey, ionkeypeptide, peptideplasma, plasmaquantification, quantificationhuman, humanarea, areaxevo, xevoinsulin, insulinuplc, uplcprotein, proteinmrm, mrmpeptides, peptidesproteinworks, proteinworksantibody, antibodyusing
Quantification of the Antibody Drug Conjugate, Trastuzumab Emtansine, and the Monocolonal Antibody, Trastuzumab, in Plasma Using a Generic Kit-Based Approach
2016|Waters|Aplikace
Quantification of the Antibody Drug Conjugate, Trastuzumab Emtansine, and the Monocolonal Antibody, Trastuzumab, in Plasma Using a Generic Kit-Based Approach Hua Yang, Mary Lame, Sherri Naughton, and Erin Chambers Waters Corporation, Milford, MA, USA A P P L I C…
Klíčová slova
trastuzumab, trastuzumabrat, ratftisadtsk, ftisadtskiyptngytr, iyptngytrgpsvfplapssk, gpsvfplapsskplasma, plasmablank, blankftisadtskntaylqmnslr, ftisadtskntaylqmnslrpeptide, peptidegpsvfplapsskstsggtaalgclvk, gpsvfplapsskstsggtaalgclvkmab, mablysine, lysineadc, adcproteinworks, proteinworkstime
