Determination of Lasalocid and Tylosin at Therapeutically Relevant Levels in Animal Feed Using the ACQUITY UPLC H-Class System and ACQUITY QDa Mass Detector

Význam tématu

Analytická detekce veterinárních látek v krmivu je klíčová pro ochranu spotřebitele a kontrolu pravdivosti označení výrobků. Metody založené na hmotnostní spektrometrii nabízejí vyšší selektivitu a citlivost při detekci látek v komplikovaných matricích, zatímco tradiční HPLC detekce (UV, fluorescenční, PDA) často narážejí na interferenci a složitou přípravu vzorku.

Cíle a přehled studie / článku

Hlavním cílem bylo porovnat stanovení lasalokidu a tylosinu v krmivu dvěma přístupy: konvenčními HPLC metodami (FLD/PDA) a moderním UPLC s detektorem QDa. Studie zahrnovala extrakci vzorků, kvantitativní srovnání výsledků a identifikaci neobvyklého aduktu tylosinu s močovinou (TUA).

Použitá metodika a instrumentace

V laboratorních postupech byly používány:

• ACQUITY UPLC H-Class System
• ACQUITY QDa Mass Detector (ESI, SIR i plný scan)
• Empower 3 CDS Software
• CORTECS UPLC C18+ a ACQUITY UPLC BEH C18 kolony
• Waters Alliance 2695 s FLD 474 a PDA 996 pro HPLC komparaci

Vzorky krmiva (10 g) se extrahovaly kyselým methanolem (lasalocid) nebo pufrem/methanolem (tylosin), filtrace membránou 0,45 µm, následovala chromatografie a masová detekce.

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivky pro obě metody vykázaly R2 nad 0,998. UPLC-MS minimalizovala interferenci matric a umožnila měření bez úplného rozlišení špiček. Porovnání 12 vzorků lasalokidu a 12 vzorků tylosinu ukázalo odchylky v rozmezí typicky do 15 %, výjimečně až 27 % v náročných matricích. Kvalitativní vzorek vykázal odchylku pod 10 % pro obě techniky. Repetabilita UPLC-MS při 10 opakovaných injekcích vykázala RSD 0,07 % (retenční čas) a 1,2 % (plocha).

Detekce aduktu tylosinu s močovinou (TUA) na m/z 958,6 a 1018,7 ukázala možnost odhalit reziduální kontaminaci pod 100 ng/mL, což HPLC-PDA neumožňuje.

Přínosy a praktické využití metody

• Jednodušší příprava a menší nutnost chromatografického rozlišení.
• Vyšší selektivita a snížení šumu matric.
• Rychlá doba náběhu detektoru QDa (~7 minut).
• Možnost provozu v běžných laboratořích bez složité kalibrace.
• Identifikace neznámých aduktů (TUA) a reziduálních zbytků.

Budoucí trendy a možnosti využití

Plánuje se rozšíření metody o další antibiotické látky a optimalizace extrakce pro jedinou injekci. Dále se předpokládá implementace multi-analyzátového stanovení kompletního spektra veterinárních doplňků a rozvoj kvantitativních protokolů pro PT studie.

Závěr

ACQUITY UPLC s QDa detektorem představuje přístup vhodný pro rutinní kontrolu veterinárních látek v krmivech. Poskytuje vysokou selektivitu, srovnatelnou kvantifikaci s tradičními metodami a navíc odhalení aduktů, které by jinak zůstaly bez povšimnutí.

Reference

1. Official Methods of Analysis of AOAC INTERNATIONAL, 19th Ed., AOAC INTERNATIONAL, 2012.
2. Official Method 2008.01, AOAC INTERNATIONAL, 2012.
3. AAFCO Proficiency Testing Program Method Performance Reports, 2015.
4. Houglum JE, Tasler MK. Liquid chromatographic assay of tylosin in animal feeds. J AOAC Int. 1996;79:369–374.