Rapid, Simple, and Effective Clean-up of Bovine Liver Samples Prior to UPLC-MS/MS Multiresidue Veterinary Drugs Analysis

Význam tématu

Veřejné zdraví a bezpečnost potravin vyžadují rychlé a spolehlivé stanovení reziduí veterinárních léčiv v masných tkáních. Býčí játra jsou bohatá na tuky a fosfolipidy, které mohou zhoršovat chromatografickou analýzu, zkracovat životnost kolony a způsobovat iontové potlačení v MS. Efektivní předúprava vzorků proto významně zvyšuje průchodnost analýzy a kvalitu dat.

Cíle a přehled studie

Hlavním cílem bylo vyvinout jednoduchý, rychlý a účinný postup čištění extraktu z býčích jater před UPLC–MS/MS analýzou multireziduálního spektra veterinárních léčiv. Součástí bylo otestovat nový reverzně-fázový sorbent Oasis PRiME HLB pro odstranění tuků i fosfolipidů a porovnat výtěžnost a čistotu s konvenčními C18 postupy.

Použitá metodika a instrumentace

Postup se skládá ze dvou klíčových kroků:

• Extrakcí homogenizované vzorku (2 g jater) s 10 mL 0,2 % kyseliny mravenčí v 85:15 acetonitril/voda.
• Pasážní SPE čištění přes Oasis PRiME HLB (6 cc, 200 mg) bez předchozí kondicionace, rychlost vakuově 2 psi.

Instrumentace:

• UPLC: ACQUITY UPLC I-Class System s kolonkou CSH C18 (2,1×100 mm, 1,7 µm).
• MS/MS: Xevo TQ-XS Mass Spectrometer (ESI+), MRM sledování více než 60 léků.
• Datové řízení: MassLynx v4.1.

Hlavní výsledky a diskuse

Čištění Oasis PRiME HLB odstranilo ≥95 % fosfolipidů a >90 % tuků z jaterních extraktů. Průměrné výtěžnosti analitů ve spíkovaných vzorcích (n=6) byly nad 70 %. Polarita některých sloučenin (tetracykliny, makrocyklická laktony) se odrazila v mírně nižší výtěžnosti, avšak signál a opakovatelnost zůstaly přijatelnými pro screening.
Post-SPE ztráty byly zanedbatelné pro většinu látek, pouze ivermektin, moxidectin, monensin a novobiocin vykazovaly 10–15 % dodatečnou ztrátu.

Přínosy a praktické využití metody

Nový protokol nabízí:

• Jednoduchou přípravu bez kondicionace SPE a následné filtraci.
• Rychlý průchod analýzy, vhodné pro vysokopropustná QA/QC stanoviště.
• Široký rozsah stanovených tříd léčiv v jediném běhu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj může směřovat k:

• Optimalizaci extrakčních podmínek pro zvýšení výtěžnosti polarit.
• Rozšíření na další biologické matrice (mléko, svalovina, droby).
• Integraci online SPE a úplné automatizaci pracovního toku.

Závěr

Popsaná metoda kombinuje jednoduchou extrakci s pasážním SPE Oasis PRiME HLB a UPLC–MS/MS, čímž dosahuje vysoké efektivity odstranění rušivých složek a spolehlivých výsledků pro multireziduální screening veterinárních léčiv v býčích játrech.

Reference

1. M. Young, K. Tran, Oasis PRiME HLB Cartridge for Effective Clean-up of Meat Extracts Prior to Multi-Residue Veterinary Drug UPLC-MS Analysis, Waters Application Brief, 2015.
2. S. Lehotay, High-Throughput Screening Analysis by UHPLC-MS/MS of >60 Veterinary Drugs in Animal Tissues, 125th AOAC Annual Meeting, Presentation 2303, 2011.