Identification of Phospholipid Molecular Species Using Neutral Loss Survey and MS3 Analysis

Význam tématu

Phospholipidy jsou základní složkou buněčných membrán a jejich detailní charakterizace na úrovni jednotlivých molekulárních druhů je klíčová pro pochopení biologických funkcí a vývoj biomarkerů.

Cíle a přehled studie

Cílem práce bylo vyvinout a ukázat účinnost systematické metody kombinuje neutral loss survey a MS3 analýzu na LCMS-IT-TOF přístroji pro přesnou identifikaci molekulárních druhů PC, PE a PS bez předchozí chromatografické separace.

Použitá metodika a instrumentace

• Extrakce lipidů z mozkové tkáně, jater a séra metodu Bligh a Dyer.
• Analyzátor: Shimadzu LCMS-IT-TOF s ESI zdrojem.
• Kolona: Si60 (1×100 mm).
• Mobilní fáze: acetonitril/methanol s 0,1 % amoniovou solí a 0,3 % acetátem.

Hlavní výsledky a diskuse

• Neutral loss survey při úbytcích 141 u (PE) a 87 u (PS) umožnila selektivní detekci příslušných tříd lipidů.
• Následná MS3 fragmentace produktů MS2 vedla k identifikaci dvou mastných kyselin v každé molekule s vysokou hmotnostní přesností.
• Bylo identifikováno 34 druhů PC, 7 druhů PS a celkem 132 různých fosfolipidů v jaterní lipidové směsi.
• Metoda prokázala potenciál kvantitativní analýzy s variacemi detekce ±20–30 %.

Přínosy a praktické využití metody

Tato analytická procedura nabízí rychlý a citlivý přístup k lipidomické charakterizaci bez rozsáhlých přípravných kroků, vhodný pro výzkum, QA/QC a klinické i průmyslové aplikace.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace s chromatografickými technikami pro separaci izobarických druhů.
• Rozšíření na další lipidové třídy (glykolipidy, sphingolipidy).
• Automatizace interpretace MS3 dat pomocí pokročilých bioinformatických nástrojů.
• Implementace do vysokopropustných lipidomických platforem pro metabolomiku.

Závěr

Kombinace neutral loss survey a MS3 analýzy na IT-TOF přináší vysoce přesnou identifikaci molekulárních druhů fosfolipidů, výrazně zjednodušuje workflow lipidomických studií a poskytuje platformu pro kvantitativní metabolomiku.

Reference

• Ishida M., Yamaguchi S., Taniguchi J., Iida J., Miseki K., Nishimura O., Shimizu T., Taguchi R. Identification of Phospholipid Molecular Species Using Neutral Loss Survey and MS3 Analysis. Technical Report vol. 2, Shimadzu Corporation.