Identification of Molecular Species of Phospholipids by combination of Neutral Loss Survey and MS3

Význam tématu

Identifikace molekulárních druhů fosfolipidů je klíčová pro pochopení jejich biologické funkce a role v membránových procesech. Detailní analýza lipidového složení podporuje výzkum metabolických drah, kvalitu biologických vzorků a farmaceutickou aplikaci.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout a ověřit metodiku založenou na kombinaci neutral loss skenování a MS3 analýzy pro selektivní detekci a identifikaci molekulárních druhů fosfolipidů bez nutnosti předběžné chromatografické separace.

Použitá metodika a instrumentace

Ultrazrychlý extrakční protokol Bligh a Dyer pro izolaci fosfolipidů z buněk MDCK, jater různých živočichů a séra.

• Elektrosprayová ionizace v negativním režimu
• Neutral loss skenování ztráty HCOO+CH3 (60 u) pro třídy PC a SM
• MS3 analýza selektivně vybraných [M–CH3] iontů pro určení mastných kyselin
• Instrumenty: 4000QTRAP (QqLIT) a LCMS-IT-TOF (TOF-ion trap) s přímou injekcí a HPLC moduly
• Mobilní fáze: acetonitril/methanol/voda s přídavkem amonného formiátu nebo acetátu

Hlavní výsledky a diskuse

Neutral loss skenování umožnilo oddělenou detekci fosfatidylcholinů a sfingomyelinů jako [M+HCOO]- iontů. Kolizní aktivací vzniklé [M–CH3] ionty sloužily jako prekurzory pro MS3, což vedlo k přesnému určení dvou mastných kyselin u každé molekuly. Bylo identifikováno 34 molekulárních druhů PC (diacyl a alka/alkenylacyl), stejně jako lyso-deriváty a sfingolipidy. Při použití IT-TOF byla dosažena hmotnostní přesnost pod 10 ppm ve všech stupních MS.

Přínosy a praktické využití metody

Díky kombinaci cíleného NL skenování a MS3 lze bez předchozí chromatografie rychle a spolehlivě profilovat fosfolipidové molekuly v komplexních biologických směsích. Metoda podporuje lipidomiku, QC biologických vzorků a farmaceutický výzkum.

Budoucí trendy a možnosti využití

Integrace s vysoce rozlišovacími Orbitrap a FT-ICR analyzátory, rozšíření na další třídy lipidů, kvantitativní workflow s vnitřními standardy a automatizace analýzy. Možnost aplikace v zobrazovací hmotové spektrometrii.

Závěr

Popisovaná metodika neutral loss skenování spojená s MS3 představuje efektivní a přesný nástroj pro detailní identifikaci molekulárních druhů fosfolipidů bez nutnosti chromatografické separace. Umožňuje rozšířit možnosti lipidomických studií a zrychlit analýzu komplexních vzorků.

Reference