Development of High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry Method for Quantitative Analysis of Bacopaside-I in Rat Urine and Feces Samples

Význam tématu

Bacopaside I je klíčový triterpenoidní saponin extrahovaný z rostliny Bacopa monnieri s prokázaným pozitivním účinkem na kognitivní funkce a prevenci neurologických onemocnění. Kvantifikace tohoto sloučeniny v biologických vzorcích je důležitá pro farmakokinetické studie a vývoj terapeutických přípravků.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo poprvé vyvinout a validovat vysoce citlivou metodiku založenou na kapalinové chromatografii v kombinaci s tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC-MS/MS) pro stanovení Bacopaside I v moči a výkalech potkanů.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci a detekci Bacopaside I byl použit systém LCMS-8030 (Shimadzu), trojnásobný kvadrupól, režim pozitivního ESI a monitoring MRM přechodů 979,4>483,4 pro analyzát a 609,3>195,0 pro reserpin jako interní standard. Chromatograficky byla aplikována Kinetex C18 kolona (1,7 µm, 50×2,1 mm) s gradientním eluce pomocí 0,1% kyseliny mravenčí ve vodě a acetonitrilu, průtok 0,3 mL/min, teplota kolony 40 °C, objem injekce 15 µL. Příprava vzorků probíhala extrakcí kapalina-kapalina z moči a výkalů potkanů.

Hlavní výsledky a diskuse

• Detekční a kvantifikační limity metody byly odhadnuty na 5 ng/mL (LOD) a 15 ng/mL (LOQ).
• Linearita kalibrační křivky v rozsahu 8,6 až 900 ng/mL pro Bacopaside I s korelačním koeficientem r2=0,9999.
• Obnova analytu v moči dosahovala 104–129 % při třech úrovních koncentrací, reproducibilita RSD 2,9–17,2 %.
• Obnova z výkalů byla výrazně nižší (29–51 %), což ukazuje potřebu optimalizace extrakčního postupu pro tuhý matrix.
• Použití reserpinu jako interního standardu s blízkou retenční dobou minimalizovalo iontové potlačení.

Přínosy a praktické využití metody

Navržená LC-MS/MS metoda umožňuje přesné a citlivé stanovení Bacopaside I ve vzorcích moči a výkalů potkanů, což je klíčové pro farmakokinetické studie a preklinický výzkum farmakodynamiky této sloučeniny.

Budoucí trendy a možnosti využití

Doporučuje se optimalizace extrakce z pevných matrixů a rozšíření metody na analýzu metabolitů Bacopaside I. Vývoj podobných protokolů by mohl zlepšit výzkum dalších bioaktivních saponinů a jejich aplikaci v klinických studiích.

Závěr

Metoda LC-MS/MS byla úspěšně vyvinuta a validována pro kvantitativní stanovení Bacopaside I v biologických vzorcích. Splňuje požadavky na citlivost, linearitu a přesnost v moči, avšak vyžaduje další úpravy pro zvýšení výtěžnosti z výkalů.

Reference

1. H.K. Singh, B.N. Dhawan, Indian J. Pharmacol. 29 (1977) S359
2. A. Russo, F. Borrelli, Phytomedicine 12 (2005) 305
3. D. Vohora, S.N. Pal, K.K. Pillai, J. Ethnopharmacol. 71 (2000) 383
4. M. Deepak, G.K. Sanggli, P.C. Arun, A. Amit, Phytochem Anal 16 (2005) 24
5. Sontaya Sookying et al., IMSC 2012 (Kyoto), Poster PTh-086 (2012)