Efficient Extraction of Propranolol, Doxepin, and Loperamide in Plasma Using Oasis PRiME MCX

Význam tématu

Bioanalytická extrakce léčiv z lidské plazmy je klíčová pro spolehlivou kvantifikaci ve farmaceutickém vývoji a vyžaduje efektivní odstranění rušivých matricových složek, zejména fosfolipidů. Rychlost, robustnost a čistota extraktů významně ovlivňují kvalitu dat v high-throughput laboratořích.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo srovnat čtyři přístupy k extrakci propranololu, doxepinu a loperamidu z lidské plazmy:

• Proteinová precipitace
• SPE s Oasis MCX
• SPE s Oasis PRiME MCX ve 4-krokovém protokolu
• SPE s Oasis PRiME MCX v zjednodušeném 3-krokovém protokolu

Hodnotily se výtěžnost, přesnost, matrické efekty a účinnost odstranění fosfolipidů.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky plazmy obohacené o analyty (1–100 ng/mL) byly zpracovány v µElution formátu na 96-well deskách. SPE protokoly se lišily počtem a typem sanačních kroků, přičemž PRiME MCX vylučuje fáze kondicionace a ekvilibrace. K separaci a detekci sloužilo:

• ACQUITY UPLC I-Class s kolonkou CSH C18 (2,1×100 mm, 1,7 μm)
• Xevo TQD s pozitivní ESI a MRM režimem
• MassLynx v4.1 s XS Application Managerem

Hlavní výsledky a diskuse

1. Výtažnost a přesnost:

• Proteinová precipitace: nízká výtěžnost ~30 %, RSD 7,8–8,6 %
• Oasis MCX a PRiME MCX (4- a 3-krok): vysoká výtěžnost 81–99 %, RSD 3,1–9,3 %

2. Matricové efekty:

• Proteinová precipitace: iontové potlačení ~–52 %
• Oasis MCX: ~–17 %
• PRiME MCX (4-krok): <10 %
• PRiME MCX (3-krok): <10 %

3. Odstranění fosfolipidů:

• Oasis MCX: odstranění až 86 %
• PRiME MCX: odstranění až 98 %

Přínosy a praktické využití metody

PRiME MCX eliminuje kondicionační kroky, zkracuje čas přípravy, odstraňuje potřebu odpařování a rekonstituce, zajišťuje čisté extrakty a umožňuje přímou injekci. Protokoly lze snadno automatizovat v high-throughput provozech.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozvoj zjednodušených SPE formátů podpoří širší adopci v klinické farmakokinetice, toxikologii a QC. Očekává se integrace s robotizovanými pracovními stanicemi, online SPE-LC-MS systémy a aplikace pro další slabé báze a polymorfní látky.

Závěr

Oasis PRiME MCX (3- a 4-krok) poskytuje výrazně lepší výtěžnost, nižší matrické efekty a účinnou eliminaci fosfolipidů než proteinová precipitace a konvenční Oasis MCX. Protokoly zkracují dobu přípravy vzorků, zvyšují robustnost a usnadňují automatizaci.

Reference

1. Moein M. M., El Beqqali A., Abdel-Rehim M. Bioanalytical method development and validation: Critical concepts and strategies. Journal of Chromatography B. 2017;1043:3–11.