Determination of Hydroxychloroquine Concentration in Human Plasma by LC-MS/MS Method

Význam tématu

Monitorování koncentrace hydroxychlorochinu (HCQ) v lidské plazmě je klíčové pro terapeutické řízení pacientů a farmakokinetické studie, zejména v kontextu léčby onemocnění COVID-19. Rychlá, citlivá a spolehlivá metoda umožňuje optimalizovat dávkování a sledovat bezpečnostní profil léku.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a validovat jednoduchou a rychlou kvantitativní metodu pro stanovení HCQ v lidské plazmě pomocí ultrarychlé kapalinové chromatografie spojené s tandemovou hmotnostní spektrometrií (UHPLC-MS/MS). Studie hodnotila specifitu, linearitu, meze kvantifikace, opakovatelnost a vliv matrice.

Použitá instrumentace

• Shimadzu Nexera UHPLC (LC-30AD, DGU-20A5, SIL-30AC, CTO-20AC, CBM-20A)
• Shimadzu LCMS-8050 triple kvadrupól
• Software LabSolutions Ver. 5.97

Použitá metodika

Vzorky byly připraveny jednoduchou precipitací proteinů acetonitrilem. Chromatografie probíhala na kolóně Shim-pack GIST C18-AQ (100×2,1 mm, 1,9 µm) při konstantním průtoku 0,5 mL/min s isokratickou elucí (20 % organické fáze). Mobilní fáze A obsahovala 0,1 % kyseliny mravenčí a 50 mM octanu amonného ve vodě, fáze B byla směs methanolu a acetonitrilu (1:1, v/v). Hmotnostní spektrometr pracoval v režimu ESI+ s definovanými MRM přechody pro HCQ (m/z 336,2→247,1 a 336,2→158,2) a vnitřní standard chloroquin (m/z 320,2→247,1).

Pro kalibraci byly připraveny standardy v rozsahu 0,5–500 ng/mL, QC vzorky na úrovních 0,5; 20 a 400 ng/mL. Vzorky byly extrahovány, centrifugovány a analyzovány injekcí 2 µL.

Hlavní výsledky a diskuse

• Linearita: korelační koeficient r ≥ 0,998 v rozsahu 0,5–500 ng/mL.
• Mez kvantifikace (LOQ): 0,5 ng/mL.
• Intra-denní přesnost (RSD): 1,57–8,33 %; přesnost zjištěná hodnota vs. nominální: 97,91–106,02 %.
• Matrix effect: 98,31–108,17 % pro HCQ i vnitřní standard.
• Stabilita vzorků po 10 hodinách při 6 °C: RSD do 7,33 %, přesnost 94,72–98,01 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí rychlou (10 min), citlivou a robustní analýzu HCQ v biologických matricích, vhodnou pro terapeutické monitorování léčby, farmakokinetické studie a vývoj nových léčiv.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření panelu analýzy o metabolity HCQ a další antimalarika.
• Integrace online SPE pro automatizované zpracování vzorků.
• Miniaturizace a high-throughput formáty pro klinické laboratoře.
• Využití pokročilých algoritmů pro zpracování dat a kvalitu výsledků.

Závěr

Vyvinutá UHPLC-MS/MS metoda na platformě Shimadzu Nexera/LCMS-8050 prokázala vysokou citlivost, přesnost a reprodukovatelnost při stanovení hydroxychlorochinu v lidské plazmě. Metoda splňuje požadavky klinického monitorování a farmakokinetiky.

Reference

1. Le Y. Determination of Hydroxychloroquine Concentration in Human Plasma by LC-MS/MS Method. Shimadzu Application No. LCMSMS-453, 2020.
2. Gautret P., Lagier J.-C., Parola P., et al. Hydroxychloroquine and Azithromycin as a Treatment of COVID-19. International Journal of Antimicrobial Agents, 2020.