Solutions for Preparative HPLC - Application Compendium

Význam tématu

Preparativní kapalinová chromatografie (HPLC) představuje klíčovou technologii pro izolaci, purifikaci a charakterizaci cílových látek v ověřování kvality i výzkumu nových sloučenin. Umožňuje separovat stopové nečistoty, metabolity či stereoisomery ve škále od mikrogramů až po gramy.

Cíle a přehled compendia

Agilent 1100/1200 Series Application Compendium shrnuje množství aplikačních poznámek, které demonstrují: izolaci nečistot, purifikaci radioaktivních a klinických metabolitů, separaci enantiomerů, masově selektivní frakcionaci, purifikaci přírodních produktů, jaderné proteiny a optimalizaci systémů pro vysoké průtoky, škálování a vzdálené vyhodnocování.

Použitá metodika a instrumentace

• Preparativní HPLC platformy Agilent 1100/1200 Series AS a PS
• Masově selektivní detektor MSD Agilent 6110/6120 Quadrupole a Multimode Source (ESI/APCI)
• Diode Array Detector (DAD), Evaporative Light Scattering Detector (ELSD)
• Dvoulupinový autosampler, aktivní a pasivní splittery, frakcionátory (12-, 40- i 120pozicové i trychtýřové)
• Software ChemStation, Purification/High Throughput, EasyAccess, vzdálený Data Browser

Hlavní výsledky a diskuse

• Izolace nečistot B a C z farmaceutického syntetického vzorku pomocí optimalizace gradientu a frakcionace na 5 µm kolónách (Recovery > 95 %, čistota > 98 %)
• Purifikace radioaktivních metabolitů z preklinických a klinických vzorků moči s objemovou injekcí 10–50 mL, sledována radiochemickým detektorem
• Separace enantiomerů na Chiralpak kolónách a škálování z analytické na preparativní kolónu s > 99 % ee
• Masově řízená frakcionace u knihoven derivátů fenothiazinu (17 kompozitních vzorků), zajišťující selektivní odběr pouze cílových složek
• Škálování metod z analytické (3 mm i.d., 0,35 mL/min) na preparativní (50 mm i.d., 100 mL/min) kolóny bez ztráty rozlišení
• Optimalizace dílčích technik: aktivní splitter, delay volume calibration, sandwich a organická injekce, recyklace kolón, alternace regenerace, kontinuální frakcionace, vzdálené vyhodnocení

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlé protokolování a škálování až do gramových množství
• Vysoká čistota frakcí (≥ 90–99 %) a výtěžky přes 90 %
• Flexibilita pro různé typy vzorků: insolubility, polarita, izomerie, přírodní extrakty i proteiny
• Automatizované workflow s minimalizací manuálních úkonů a chyb
• Integrace detektorů (UV, MS, ELSD), sofistikovaná správa systémů a uživatelský režim – walk-up

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj míří ke zcela automatizované preparativní linkě s inteligentními softwarovými moduly kombinujícími chromatografii a hmotnostní spektrometrii, online frakcionace v reálném čase, škálování do větších výrobních objemů a využití strojového učení pro predikci optimálních metod.

Závěr

Agilent 1100/1200 Series purification platformy poskytují modulární, plně konfigurovatelné řešení preparativní HPLC s masově selektivní frakcí, vysokým průtokem i analytickým dozorem kvality. Zahrnují široké spektrum aplikací od izolace nečistot po purifikaci stereoisomerů, přírodních produktů a proteinů s vysokou čistotou, výtěžností a provozní efektivitou.

Reference

• Application Compendium – Solutions for Preparative HPLC, Agilent Technologies 2006
• Impurity Profiling … Part 2. Isolation of Impurities with Preparative HPLC, Agilent 5989-5618EN
• Isolation and Purification of Radiolabeled Drug Metabolites …, Agilent 5988-2088EN
• Purification of Enantiomers on the Agilent 1100 Series …, Agilent 5988-3396EN
• High Performance Mass-based Frac. Collection …, Agilent 5989-5673EN
• Configuring a Mass-based Frac. Collection …, Agilent 5989-4845EN
• The Agilent 1100 Series Dual-loop Autosampler PS, Agilent 5989-1714EN
• Automated Injection Pump System …, Agilent 5989-0029EN
• Protein Purification and Characterization …, Agilent 5988-8630EN
• Recycle Chromatography with the Agilent 1100 Series …, Agilent 5989-1693EN