Low Adduct Peptide LC-MS Obtained with IonHance DFA and Certified LDPE Containers

Význam tématu

Minimální kontaminace mobilních fází kovovými ionty hraje klíčovou roli v dosažení vysoce kvalitních hmotnostních spekter peptidů a proteinů. Ionty sodíku a draslíku mohou způsobit zkreslení relativních intenzit protonovaných iontů a zahlcení spektra, což komplikuje interpretaci dat, zejména v citlivých LC-MS aplikacích pro výzkum a výrobu bioterapeutik.

Cíle a přehled studie

Studie si klade za cíl omezit vliv kovových aduktů na peptidové spektrum při použití modifikované mobilní fáze s IonHance™ DFA a nových certifikovaných LDPE nádob. Pro hodnocení se využívá komerční standard mAb Tryptic Digestion Standard (NIST RM 8671 digest), separovaný na ACQUITY™ UPLC™ Peptide CSH C18 kolóně.

Použitá metodika a instrumentace

Pro testování kvality hmotnostních spekter byla použita následující instrumentace a materiály:

• UPLC systém ACQUITY UPLC s kolónou Peptide CSH C18, 130 Å, 1,7 µm, 2,1 × 150 mm
• Ionizační zdroj ESI a hmotnostní analyzátor Waters
• Mobilní fáze: 0,1 % IonHance DFA ve vodě 18,2 MΩ
• Příprava mobilní fáze v certifikovaných LDPE nádobách Waters (p/n 186009110)

Hlavní výsledky a diskuse

Ve spektru peptidu T13 (VQWK) připraveném s IonHance DFA a certifikovanými LDPE nádobami byly adukty sodíku a draslíku minimální, což umožnilo snadnou a jednoznačnou interpretaci. Naproti tomu mobilní fáze připravená v běžných LC-MS nádobách a s externě nakoupenou vodou vykazovala výrazné aduktové signály, které zkreslovaly kvantitativní a kvalitativní vyhodnocení.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda přináší výrazné snížení kovových aduktů v hmotnostních spektrách, což vede ke:

• lepší spolehlivosti kvantitativních a kvalitativních analýz peptidů,
• zvýšení citlivosti a selektivity při identifikaci a charakterizaci proteinů,
• optimalizaci vývojových a výrobních procesů bioterapeutik.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj čistých obalových materiálů a optimalizace mobilních fází pro různé analytické platformy. Integrace automatizovaných systémů přípravy mobilních fází s monitorováním stopových kovů by mohla dále zvýšit reprodukovatelnost a throughput. Dále je možné kombinovat IonHance přísady s dalšími čistícími technologiemi pro komplexní proteomické a biologické aplikace.

Závěr

Kombinace vysoce čisté mobilní fáze modifikované IonHance DFA a certifikovaných LDPE nádob významně redukuje sodné a draselné adukty v LC-MS peptidových analýzách. Díky tomu se zvyšuje kvalita spekter a spolehlivost dat, což je zásadní pro biochemické výzkumy, vývoj a kontrolu kvality bioterapeutik.

Reference

• Nguyen J., Liu X., Lauber M. Low Adduct Peptide LC-MS Obtained with IonHance DFA and Certified LDPE Containers. Waters Corporation, 2019.