Plazmatické metanefriny (PFM) jsou vysoce specifickými indikátory extraadrenálních chromafinních nádorů. Jelikož jsou katecholaminy metabolizovány v chromafinních buňkách na metanefriny nebo normetanefriny, můžeme tyto metabolity použít k diagnóze feochromocytomů. Stanovení PFM je velkou výzvou, jelikož se jedná o polární látky s nízkou molekulární hmotností a nízkou fyziologickou koncentrací v lidské plazmě. Nicméně s přístroji Thermo Scientific není žádná analýza nemožná!
Ke stanovení metanefrinů musí vzorky nejprve projít solid phase extrakcí (SPE), která je následována chromatografickou separací na UHPLC systému <a href="https://lcms.cz/products/396">Thermo Vanquish Flex</a>. K detekci dochází na přístroji <a href="https://lcms.cz/products/404">Thermo TSQ Altis</a> s HESI v pozitivním ionizačním módu s pomocí SRM. Tento hmotnostní spektrometr je založen na bázi trojitých kvadrupólů.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Pragolab_Tabulka_a_popis_SRM_parametru_8a98b6a136/Pragolab-Tabulka-a-popis-SRM-parametru.png" alt="Pragolab: Tabulka a popis SRM parametrů kvantifikace volných metanefrinů v lidské plazmě pomocí LC-MS/MS "/>
Výsledky se potom vyhodnotí v aplikaci <a href="https://lcms.cz/products/140">ClinMass</a>, která obsahuje kompletní kit pro stanovení volných metanefrinů v plazmě od společnosti <a href="https://lcms.cz/products?manufacturerItems=56">Recipe Chemicals + Instriments</a>.
Pokud se chcete o této metodě dozvědět více, přečtěte si <a href="https://lcms.cz/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/tn_73768_lc_ms_metanephrines_human_plasma_tn73768_en_f3dc545527/tn-73768-lc-ms-metanephrines-human-plasma-tn73768-en.pdf">kompletní aplikační nótu</a>. 
<h5>Klíčová slova:</h5>
<ul>
<li><a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=3&amp;search=metanephrines">Metanefriny</a></li>
<li><a href="https://www.pragolab.cz/chromatografie-a-ms/hplc-ms/kvadrupoly/tsq-altis-plus">Altis</a></li>
<li><a href="https://www.pragolab.cz/chromatografie-a-ms/hplc/vanquish-uhplc">Vanquish</a></li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=3&amp;search=ClinMass">ClinMass</a></li>
<li><a href="**https://lcms.cz/library?mainauthorItems=3&amp;search=TDM**">TDM</a></li>
<li><a href="https://www.pragolab.cz/chromatografie-a-ms/hplc-ms">LCMS</a></li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=3&amp;search=human+plasma">Plazma</a></li>
</ul>
<h3>Aplikace analýzy <a href="https://lcms.cz/library?search=metanephrines&amp;mainauthorItems=3">metanefrinů v knihovně LabRulezLCMS</a></h3>
<ul>
<li>Quantification of Catecholamines and Metanephrines in Urine Using the Thermo Scientific™ TSQ Endura™ Mass Spectrometer for Research Use (Aplikace | 2017)
</li>
<li>Quantification of free metanephrines in human plasma by LC-HRAM mass spectrometry for clinical research (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Quantification of free metanephrines in human plasma by LC-MS/MS for clinical research (Aplikace | 2020)
</li>
<li>MSACL EU 2017: Quantification of Catecholamines and Metanephrines in Urine Using the Thermo Scientific™ TSQ Endura™ Mass Spectrometer for Research Use (Postery | 2017)
</li>
<li>Determination and quantitation of catecholamines and metanephrines in urine with an efficient sample preparation and LC-MS/MS workflow for clinical research use (Aplikace | 2017)
</li>
<li>Plasma Free Metanephrines Quantitation with Automated Online Sample Preparation and Liquid Chromatography—Tandem Mass Spectrometry (Aplikace | 2012)
</li>
<li>Quantitative Measurement of Plasma Free Metanephrines by Ion-Pairing Solid Phase Extraction and LC-MS/MS with Porous Graphitic Carbon Column (Aplikace | 2011)
</li>
</ul>

LC-MS/MS kvantifikace volných metanefrinů v lidské plazmě pro klinický výzkum

<h3>Úvod</h3>
Tricyklická antidepresiva (TCA) se běžně používají k úlevě od deprese, úzkostí a neuropatické bolesti. I přes to, že tyto léky mají závažné vedlejší účinky i při terapeutických dávkách, stále se předepisují, jelikož jsou účinnější než jiná antidepresiva. Monitoring hladin TCA v séru může zlepšit terapeutické zvládání deprese u pacientů, u kterých může dojít k problémům s mezilékovou interakcí či s toxicitou.
<h3>Metody</h3>
V posledních 30 letech se ke stanovení TCA nejčastěji používalo <a href="https://lcms.cz/library?categoryItems=12&amp;instrumentationItems=27&amp;mainauthorItems=3&amp;search=tricyclic">HPLC s UV detektorem</a>. Nicméně v poslední době stoupají požadavky na citlivost, selektivitu a specificitu, a to vedlo ke vzniku metod pro <a href="https://lcms.cz/library?categoryItems=12&amp;instrumentationItems=31&amp;mainauthorItems=3&amp;search=tricyclic">LC-MS jak pro diagnostiku TCA</a>, tak i pro vývoj nových metod a léčiv.
V tomto článku se budeme věnovat metodě pro stanovení 15 tricyklických antidepresiv v lidské plazmě či séru. Seznam těchto analytů můžete nalézt v tabulce č. 1. I když většina LC-MS metod pro stanovení těchto látek počítá s využitím <a href="https://lcms.cz/products?category=20&amp;manufacturerItems=3">hmotnostních spektrometrů na bázi trojitých kvadrupólů</a>, v tomto článku se podíváme na data, která jsme získali použitím high-resolution accurate mass (HRAM) hmotnostní spektrometrie na hmotnostním spektrometru <a href="https://lcms.cz/products/403">Thermo Scientific™ Orbitrap Exploris™ 120</a>.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Pragolab_Tabulka_c_1_Seznam_analytu_a_internich_standardu_b8af38865c/Pragolab-Tabulka-c.1-Seznam-analytu-a-internich-standardu.jpg" alt="Pragolab: Tabulka č.1 Seznam analytů a interních standardů"/>
<h3>Experiment</h3>
Vzorky krevní plazmy nebo séra byly extrahovány a podstoupily precipitaci proteinů. Extrahované vzorky byly poté nastříknuty do kapalinového chromatografu Thermo Scientific™ Vanquish™ Flex Binary UHPLC, který byl připojen k hmotnostnímu spektrometru Orbitrap Exploris 120 se zdrojem HESI. Detekce analytů probíhala na full skenu v pozitivním ionizačním módu (přesné parametry nastavení MS naleznete v Tabulce č.2), který byl spojen s data-dependentní fragmentací (fullMS-ddMS2). Metoda byla poté vyhodnocena s použitím databáze <a href="https://lcms.cz/library?manufacturerItems=53-2&amp;search=ClinMass">ClinMass TDM Platform</a> s ClinMass Add-On Setem pro Tricyklické Antidepresiva od společnosti <a href="https://lcms.cz/products?manufacturerItems=56">RECIPE Chemicals + Instruments GmbH</a>.
<h4>Tabulka č. 2 Popis parametrů hmotnostního spektrometru</h4>
<h5>Ion source parameters</h5>
<ul>
<li>Source type: High Electrospray Source Ionization (H-ESI)</li>
<li>Polarity: Positive</li>
<li>Spray voltage - Positive (V): 3,500</li>
<li>Sheath gas (Arb): 50</li>
<li>Aux gas (Arb): 10</li>
<li>Sweep gas (Arb): 0</li>
<li>Ion transfer tube temp. (°C): 300</li>
<li>Vaporizer temp. (°C): 320</li>
</ul>
<h5>Settings</h5>
<ul>
<li>Mild trapping: No</li>
<li>Data acquisition mode: Experiment 1: Full scan - ddMS²; Experiment 2: tMS² using a mass list inclusion</li>
<li>Internal mass calibration: RunStart Easy-IC™</li>
</ul>
<h5>Full scan parameters</h5>
<ul>
<li>Orbitrap resolution (@ m/z 200): 60,000</li>
<li>Scan range: 250–350</li>
<li>RF lens (%): 70</li>
<li>AGC target: Standard</li>
<li>Maximum injection time mode: Auto</li>
</ul>
<h5>Data-dependent MS² scan properties</h5>
<ul>
<li>Orbitrap resolution (@ m/z 200): 15,000</li>
<li>Isolation window (m/z): 2</li>
<li>Collision energy type: Normalized</li>
<li>HCD collision energy (%): 30</li>
<li>Scan range mode: Auto</li>
</ul>
<h5>Targeted MS² scan properties</h5>
<ul>
<li>Orbitrap resolution (@ m/z 200): 30,000</li>
<li>Isolation window (m/z): 2.0</li>
<li>Collision energy type: Normalized</li>
<li>HCD collision energy (%): 30</li>
</ul>
<h3>Výsledky</h3>
Procentuální zkreslení mezi nominálními a zpětně vypočítanými koncentracemi byla vždy v rozmezí ±15% pro všechny kalibrátory. LLOQ hodnoty pro všechny analyty můžete nalézt níže (Tabulka č. 3). Při analýze blank vzorku nedošlo k detekci žádného signálu, a to ani poté, co byl blank nastříknut po nejkoncentrovanějším kalibrátoru. S touto metodou jsme dosáhli dobré přesnosti a reprodukovatelnosti, kdy maximální %CV bylo vždy pod 7,1% a 4,2% pro intra- a inter-assay přesnost.
<h4>Tabulka č. 3 LLOQs pro všechny analyty</h4>
<h5>Analyte / LLOQ (μg/L)</h5>
<ul>
<li>Amitriptyline / 3.26</li>
<li>Clomipramine / 18.3</li>
<li>Clozapine / 5.85</li>
<li>Desipramine / 1.81</li>
<li>Doxepin / 14.8</li>
<li>Imipramine / 3.34</li>
<li>Maprotiline / 24.2</li>
<li>Norclomipramine / 21.1</li>
<li>Norclozapine / 9.46</li>
<li>Nordoxepin / 0.680</li>
<li>Normaprotiline / 3.34</li>
<li>Nortrimipramine / 2.20</li>
<li>Nortriptyline / 1.82</li>
<li>Protriptyline / 3.38</li>
<li>Trimipramine / 2.73</li>
</ul>
Pokud se chcete dozvědět více, přečtěte si kompletní <a href="https://www.pragolab.cz/files/clanky/2022-01/tn-66058-lc-hram-ms-15-tricyclic-antidepressants-human-plasma-serum-tn66058-en.pdf">aplikační nótu</a>.
<h3>Přehled nejnovějších dokumentů zaměřených na LC/Orbitrap z oblasti Klinická analýza od Thermo Fischer Scientific <a href="https://lcms.cz/library?categoryItems=12&amp;from=2021&amp;instrumentationItems=31-33-30-32&amp;mainauthorItems=3&amp;to=2022">v knihovně LabRulezLCMS</a></h3>
<ul>
<li>ASMS 2021: Analysis of Intact Resistance Markers for Metallo-b-Lactamases in Bacterial Pathogens (Postery | 2021)
</li>
<li>ASMS 2021: High-Flow LC/MS Analysis of Immunosuppressant Drugs in Human Blood Using FAIMS Technology (Prezentace | 2021)
</li>
<li>ASMS 2021: A Fully Automated High-Throughput, Deep-Scale Quantitative Plasma Proteomics Workflow Enables Quantitively Profile More Than 1000 Proteins Per Sample (Postery | 2021)
</li>
<li>ASMS 2021: Characterization of Adeno-Associated Viral assemblies on an Ultra-High Mass Range Hybrid Quadrupole-Orbitrap Mass Spectrometer (Postery | 2021)
</li>
<li>ASMS 2021: Identifying Antibiotic Resistance Through Direct Detection of Intact Enzymes from Bacterial Lysates using LC-MS/MS: Exploring MRSA and Carbapenem Resistance (Postery | 2021)
</li>
<li>ASMS 2021: An intelligent Hybrid-DIA data acquisition strategy for cracking the clinical sample complexity challenge in translational proteotyping (Postery | 2021)
</li>
<li>Quantification of 27 antiepileptics in human plasma by LC-HRAM-MS for clinical research (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Quantification of 36 antidepressants in human plasma by LC-HRAM-MS for clinical research (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Quantification of four immunosuppressants in human blood by LC-HRAM-MS for clinical research (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Quantification of 35 benzodiazepines in human plasma by LC-HRAM-MS for clinical research (Aplikace | 2021)
</li>
<li>LC-MS for detection of SARS-CoV-2 viral and host proteins (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Quantification of immunosuppressants in human blood by LC-HRAM mass spectrometry for clinical research (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Quantification of 25-hydroxyvitamin D2 and D3 in human plasma by LC-HRAM-MS for clinical research (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Quantification of eight antimycotics in human plasma by LC-HRAM-MS for clinical research (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Quantification of total homocysteine in human plasma or serum by LC-HRAM-MS for clinical research (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Quantification of free metanephrines in human plasma by LC-HRAM mass spectrometry for clinical research (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Quantification of 34 benzodiazepines in human plasma by LC-HRAM-MS for clinical research (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Quantification of 15 tricyclic antidepressants in human plasma or serum by LC-HRAM-MS for clinical research (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Quantification of mycophenolic acid in human plasma using an Orbitrap Exploris 120 high- resolution mass spectrometer for clinical research (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Fast LC-HRAM-MS quantification of 36 antidepressants in human plasma using the Orbitrap Exploris 120 mass spectrometer for clinical research (Aplikace | 2021)
</li>
</ul>

Kvantifikace 15 tricyklických antidepresiv v lidské plazmě či séru

Těšit se můžete na:
<ul>
<li>zajímavé přednášky</li>
<li>ukázky přístrojů</li>
<li>bohaté občerstvení</li>
</ul>
<h5>V rámci semináře Vás srdečně zveme na interaktivní workshop nad produkty:</h5>
<ul>
<li><a href="https://lcms.cz/library?search=Metaboauto">Metaboauto</a> &amp; PAL 3 CTC - stanovení metabolomitů</li>
<li><a href="https://lcms.cz/products/396">Vanquish</a> Flex &amp; <a href="https://lcms.cz/products?manufacturerItems=56">RECIPE</a> - stanovení vit. A/E</li>
<li><a href="https://lcms.cz/products/125">Iontové zdroje Plasmion</a> – analýza dechu</li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?manufacturerItems=2&amp;search=Evosep">Evosep One</a> – klinická proteomika</li>
</ul>
<h5>Přednášející:</h5>
<ul>
<li>prof. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. (Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové)</li>
<li>Mgr. Marie Vajrychová, Ph.D. (Centrum biomedicínského výzkumu, Fakultní nemocnice Hradec Králové)</li>
<li>doc. RNDr. David Friedecký, Ph.D. (Oddělení klinické biochemie, Fakultní nemocnice Olomouc)</li>
<li>Hans-Joachim Hübschmann (CTC Analytics AG)</li>
<li>Ing. Martin Moos, Ph.D. (Biologické Centrum AV ČR)</li>
<li>Thomas Ristau (RECIPE)</li>
<li>Edward Goucher (Thermo Fisher Scientific)</li>
<li>Erik Verschuuren (Evosep Biosystems)</li>
<li>Mgr. Lukáš Najdekr, Ph.D. (Ústav molekulární a translační medicíny Lékařské fakulty Univerzity Palackého, Olomouc)</li>
<li>Dr. Jan Buček (Plasmion)</li>
</ul>
Z důvodu omezené kapacity se prosím registrujte v <a href="https://forms.office.com/Pages/ResponsePage.aspx?id=aR-wpy9pT0iMxW5H7RJK8WO2jiQLb7NOszjVkgYyezJUMUU1M1ZHU0c2WFpVMlQxSlFDNDFGUVhXTC4u">přihlašovacím formuláři</a> nejpozději do 11.11.2022.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Pragolab_and_Partners_Hmotnostni_spektrometrie_v_klinicke_analyze_Mass_Spectrometry_in_Clinical_Analysis_ee3c7d0d64/Pragolab-and-Partners-Hmotnostni-spektrometrie-v-klinicke-analyze-Mass-Spectrometry-in-Clinical-Analysis.webp" alt="Pragolab &amp; Partners: Hmotnostní spektrometrie v klinické analýze / Mass Spectrometry in Clinical Analysis"/>
<h3>Program</h3>
<h5>08:30 Registrace a welcome coffee</h5>
<h5>09:00 Zahájení</h5>
<ul>
<li>Lukáš Plaček, František Zaleš a Zuzana Snížková (Pragolab)</li>
</ul>
<h4>Automatizovaná příprava vzorků</h4>
<h5>09:05 Moderní trendy v přípravě vzorku pro analýzu separačními technikami</h5>
<ul>
<li>Lucie Nováková (Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové)</li>
</ul>
<h5>09:55 Automated Sample Preparation for Life Sciences and Clinical Analysis</h5>
<ul>
<li>Hans-Joachim Hübschmann (CTC Analytics AG)</li>
</ul>
<h5>10:15 Platforma automatizované přípravy vzorků pro on-line xC-MS metabolomiku</h5>
<ul>
<li>Martin Moos (Biologické Centrum AV ČR)</li>
</ul>
<h5>10:35 Coffee break</h5>
<h4>Hmotnostní spektrometrie malých molekul</h4>
<h5>11:00 Hmotnostní spektrometrie v diagnostice a léčbě</h5>
<ul>
<li>David Friedecký (Oddělení klinické biochemie, Fakultní nemocnice Olomouc)</li>
</ul>
<h5>11:20 Therapeutic Drug monitoring with <a href="https://lcms.cz/library?manufacturerItems=2-53&amp;search=ClinMass">ClinMass® LCMS Kit System</a></h5>
<ul>
<li>Thomas Ristau (RECIPE)</li>
</ul>
<h5>11:40 Advances in LC-MS Workflows and Orthogonal Technologies for Clinical Research</h5>
<ul>
<li>Edward Goucher (Thermo Fisher Scientific)</li>
</ul>
<h5>12:00 Oběd</h5>
<h4>Klinická proteomika a metabolomika</h4>
<h5>13:00 (“MS-based”) Proteomika v biomedicínském výzkumu</h5>
<ul>
<li>Marie Vajrychová (Centrum biomedicínského výzkumu, Fakultní nemocnice Hradec Králové)</li>
</ul>
<h5>13:20 <a href="https://lcms.cz/library?manufacturerItems=2&amp;search=Evosep">Evosep One</a>: Making sample separation 10 times faster and 100 times more robust, to enable Clinical Proteomics Studies</h5>
<ul>
<li>Erik Verschuuren (Evosep Biosystems)</li>
</ul>
<h5>13:40 Molecular profiling of cardiovascular diseases applying untargeted lipidomics approach</h5>
<ul>
<li>Lukáš Najdekr (Ústav molekulární a translační medicíny Lékařské fakulty Univerzity Palackého, Olomouc)</li>
</ul>
<h5>14:00 Empowering Clinical Diagnostics with <a href="https://lcms.cz/products/125">SICRIT® Ionization Technology</a></h5>
<ul>
<li>Jan Buček (Plasmion)</li>
</ul>
<h5>14:30 Interaktivní workshop s kávou</h5>
Zde budete mít možnost osobně si promluvit se zástupci jednotlivých společností a probrat Vaše konkrétní otázky, požadavky, představy či zkušenosti.
Vždy bude přítomen i zástupce naší společnosti, který zajistí překlad, bude-li potřeba. Setkání si prosím předběžně zarezervujte v rámci <a href="https://forms.office.com/Pages/ResponsePage.aspx?id=aR-wpy9pT0iMxW5H7RJK8WO2jiQLb7NOszjVkgYyezJUMUU1M1ZHU0c2WFpVMlQxSlFDNDFGUVhXTC4u">registračního formuláře</a>.
<h5>16.30 Zakončení</h5>
Akce bude probíhat v českém a anglickém jazyce a primárním jazykem bude čeština.
Váš tým Pragolab s.r.o.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Pragolab_and_Partners_Hmotnostni_spektrometrie_v_klinicke_analyze_Mass_Spectrometry_in_Clinical_Analysis_ee3c7d0d64/Pragolab-and-Partners-Hmotnostni-spektrometrie-v-klinicke-analyze-Mass-Spectrometry-in-Clinical-Analysis.webp" alt="Pragolab &amp; Partners: Hmotnostní spektrometrie v klinické analýze / Mass Spectrometry in Clinical Analysis"/>

Hmotnostní spektrometrie v klinické analýze / Mass Spectrometry in Clinical Analysis

Webináře

Aplikace

Akademie

Osobnosti

Plasty

Životní prostředí

Potraviny

Vody

Zdraví

Přednáška

Vědecký článek

Rozhovor

Toxikologie

Popularizace

Věda a výzkum

Software

Covid-19

Kariéra

Článek

Laboratoře

Různé

Produkt

Video

Poster

Nejbližší akce

Typ novinky

Zaměření

Jsme jedním z lídrů na českém a slovenském trhu v oblasti laboratorních zařízení a svým zákazníkům přinášíme špičkové přístroje z oboru analytické chemie a fyzikálních měření více než 25 let.

Pragolab

Moderní elektroanalytické metody (Cena Metrohm 2026)

ALS Kurz Analýzou HYDRAULICKÝCH a TURBÍNOVÝCH olejů k větší efektivitě výroby

Praktický kurz ŠKOLA HPLC

Big Scale, Big Wins: Prep Chromatography Explained

High-throughput stability screening strategies for antibody formulation

PFAS in Food & Food Contact Material