Kvantifikace 15 tricyklických antidepresiv v lidské plazmě či séru

Úvod

Tricyklická antidepresiva (TCA) se běžně používají k úlevě od deprese, úzkostí a neuropatické bolesti. I přes to, že tyto léky mají závažné vedlejší účinky i při terapeutických dávkách, stále se předepisují, jelikož jsou účinnější než jiná antidepresiva. Monitoring hladin TCA v séru může zlepšit terapeutické zvládání deprese u pacientů, u kterých může dojít k problémům s mezilékovou interakcí či s toxicitou.

Metody

V posledních 30 letech se ke stanovení TCA nejčastěji používalo HPLC s UV detektorem. Nicméně v poslední době stoupají požadavky na citlivost, selektivitu a specificitu, a to vedlo ke vzniku metod pro LC-MS jak pro diagnostiku TCA, tak i pro vývoj nových metod a léčiv.

V tomto článku se budeme věnovat metodě pro stanovení 15 tricyklických antidepresiv v lidské plazmě či séru. Seznam těchto analytů můžete nalézt v tabulce č. 1. I když většina LC-MS metod pro stanovení těchto látek počítá s využitím hmotnostních spektrometrů na bázi trojitých kvadrupólů, v tomto článku se podíváme na data, která jsme získali použitím high-resolution accurate mass (HRAM) hmotnostní spektrometrie na hmotnostním spektrometru Thermo Scientific™ Orbitrap Exploris™ 120.

Pragolab: Tabulka č.1 Seznam analytů a interních standardů

Experiment

Vzorky krevní plazmy nebo séra byly extrahovány a podstoupily precipitaci proteinů. Extrahované vzorky byly poté nastříknuty do kapalinového chromatografu Thermo Scientific™ Vanquish™ Flex Binary UHPLC, který byl připojen k hmotnostnímu spektrometru Orbitrap Exploris 120 se zdrojem HESI. Detekce analytů probíhala na full skenu v pozitivním ionizačním módu (přesné parametry nastavení MS naleznete v Tabulce č.2), který byl spojen s data-dependentní fragmentací (fullMS-ddMS2). Metoda byla poté vyhodnocena s použitím databáze ClinMass TDM Platform s ClinMass Add-On Setem pro Tricyklické Antidepresiva od společnosti RECIPE Chemicals + Instruments GmbH.

Tabulka č. 2 Popis parametrů hmotnostního spektrometru

Ion source parameters

• Source type: High Electrospray Source Ionization (H-ESI)
• Polarity: Positive
• Spray voltage - Positive (V): 3,500
• Sheath gas (Arb): 50
• Aux gas (Arb): 10
• Sweep gas (Arb): 0
• Ion transfer tube temp. (°C): 300
• Vaporizer temp. (°C): 320

Settings

• Mild trapping: No
• Data acquisition mode: Experiment 1: Full scan - ddMS²; Experiment 2: tMS² using a mass list inclusion
• Internal mass calibration: RunStart Easy-IC™

Full scan parameters

• Orbitrap resolution (@ m/z 200): 60,000
• Scan range: 250–350
• RF lens (%): 70
• AGC target: Standard
• Maximum injection time mode: Auto

Data-dependent MS² scan properties

• Orbitrap resolution (@ m/z 200): 15,000
• Isolation window (m/z): 2
• Collision energy type: Normalized
• HCD collision energy (%): 30
• Scan range mode: Auto

Targeted MS² scan properties

• Orbitrap resolution (@ m/z 200): 30,000
• Isolation window (m/z): 2.0
• Collision energy type: Normalized
• HCD collision energy (%): 30

Výsledky

Procentuální zkreslení mezi nominálními a zpětně vypočítanými koncentracemi byla vždy v rozmezí ±15% pro všechny kalibrátory. LLOQ hodnoty pro všechny analyty můžete nalézt níže (Tabulka č. 3). Při analýze blank vzorku nedošlo k detekci žádného signálu, a to ani poté, co byl blank nastříknut po nejkoncentrovanějším kalibrátoru. S touto metodou jsme dosáhli dobré přesnosti a reprodukovatelnosti, kdy maximální %CV bylo vždy pod 7,1% a 4,2% pro intra- a inter-assay přesnost.

Tabulka č. 3 LLOQs pro všechny analyty

Analyte / LLOQ (μg/L)

• Amitriptyline / 3.26
• Clomipramine / 18.3
• Clozapine / 5.85
• Desipramine / 1.81
• Doxepin / 14.8
• Imipramine / 3.34
• Maprotiline / 24.2
• Norclomipramine / 21.1
• Norclozapine / 9.46
• Nordoxepin / 0.680
• Normaprotiline / 3.34
• Nortrimipramine / 2.20
• Nortriptyline / 1.82
• Protriptyline / 3.38
• Trimipramine / 2.73

Pokud se chcete dozvědět více, přečtěte si kompletní aplikační nótu.

Přehled nejnovějších dokumentů zaměřených na LC/Orbitrap z oblasti Klinická analýza od Thermo Fischer Scientific v knihovně LabRulezLCMS

• ASMS 2021: Analysis of Intact Resistance Markers for Metallo-b-Lactamases in Bacterial Pathogens (Postery | 2021)

• ASMS 2021: High-Flow LC/MS Analysis of Immunosuppressant Drugs in Human Blood Using FAIMS Technology (Prezentace | 2021)

• ASMS 2021: A Fully Automated High-Throughput, Deep-Scale Quantitative Plasma Proteomics Workflow Enables Quantitively Profile More Than 1000 Proteins Per Sample (Postery | 2021)

• ASMS 2021: Characterization of Adeno-Associated Viral assemblies on an Ultra-High Mass Range Hybrid Quadrupole-Orbitrap Mass Spectrometer (Postery | 2021)

• ASMS 2021: Identifying Antibiotic Resistance Through Direct Detection of Intact Enzymes from Bacterial Lysates using LC-MS/MS: Exploring MRSA and Carbapenem Resistance (Postery | 2021)

• ASMS 2021: An intelligent Hybrid-DIA data acquisition strategy for cracking the clinical sample complexity challenge in translational proteotyping (Postery | 2021)

• Quantification of 27 antiepileptics in human plasma by LC-HRAM-MS for clinical research (Aplikace | 2021)

• Quantification of 36 antidepressants in human plasma by LC-HRAM-MS for clinical research (Aplikace | 2021)

• Quantification of four immunosuppressants in human blood by LC-HRAM-MS for clinical research (Aplikace | 2021)

• Quantification of 35 benzodiazepines in human plasma by LC-HRAM-MS for clinical research (Aplikace | 2021)

• LC-MS for detection of SARS-CoV-2 viral and host proteins (Aplikace | 2021)

• Quantification of immunosuppressants in human blood by LC-HRAM mass spectrometry for clinical research (Aplikace | 2021)

• Quantification of 25-hydroxyvitamin D2 and D3 in human plasma by LC-HRAM-MS for clinical research (Aplikace | 2021)

• Quantification of eight antimycotics in human plasma by LC-HRAM-MS for clinical research (Aplikace | 2021)

• Quantification of total homocysteine in human plasma or serum by LC-HRAM-MS for clinical research (Aplikace | 2021)

• Quantification of free metanephrines in human plasma by LC-HRAM mass spectrometry for clinical research (Aplikace | 2021)

• Quantification of 34 benzodiazepines in human plasma by LC-HRAM-MS for clinical research (Aplikace | 2021)

• Quantification of 15 tricyclic antidepressants in human plasma or serum by LC-HRAM-MS for clinical research (Aplikace | 2021)

• Quantification of mycophenolic acid in human plasma using an Orbitrap Exploris 120 high- resolution mass spectrometer for clinical research (Aplikace | 2021)

• Fast LC-HRAM-MS quantification of 36 antidepressants in human plasma using the Orbitrap Exploris 120 mass spectrometer for clinical research (Aplikace | 2021)