Proč je moje výtěžnost vyšší než 100 %?
Phenomenex: Proč je moje výtěžnost vyšší než 100 %?
Při provádění extrakce analytu pomocí SPE obvykle očekáváme 100% výtěžnost (recovery). Pokud je výtěžnost nižší, naznačuje to problém s uvolněním analytu ze sorbentu. Jaké jsou ale důvody, proč může být pozorovaná výtěžnost vyšší, než očekáváme (tj. > 100 %)?
Nejčastější problémy
- Koeluující interference
- Kontaminanty pocházející z rozpouštědla nebo zvoleného sorbentu
- Poškozený nebo nevhodný interní standard, který zkresluje referenční bod
- Chyby ve výpočtu výtěžnosti
Podívejme se na jednotlivé příčiny podrobněji.
Koeluující interference
Tyto látky jsou obvykle přítomny v matrici a cílem SPE kroku je jejich odstranění. Pokud pozorujete výtěžnosti vyšší než 100 %, prvním krokem by měla být kontrola eluátu pomocí ortogonální analytické techniky, která ověří, zda je zvýšená výtěžnost skutečně způsobena koelucí.
Pokud je koeluce potvrzena, existuje několik možných řešení:
- Upravit promývací kroky SPE metody tak, aby se nečistoty selektivně odstranily během promývání
- Zvolit alternativní SPE sorbent, který bude tyto interference lépe odstraňovat. To je obzvlášť efektivní, pokud lze analyt nebo interferující látku selektivně ionizovat – iontoměničové sorbenty velmi často poskytují čistší extrakty než reverzní nebo normální fáze
- Upravit analytickou metodu tak, aby bylo možné oba píky analyticky rozlišit, a tím eliminovat nutnost odstraňovat interferenci již v SPE kroku
- Analyzovat slepý (blank) vzorek plazmy – tím lze identifikovat přítomné nečistoty a tyto signály následně odečíst při výpočtu výtěžnosti
Kontaminanty z rozpouštědla nebo sorbentu
Tyto nečistoty bývají přítomny ve výchozích materiálech a mají podobné vlastnosti jako sledovaný analyt. V důsledku toho koeluují s analytem během SPE i následného analytického stanovení.
Postup řešení může být následující:
- Použít výše uvedené strategie pro odstranění koeluujících nečistot
- Protože se nejedná o kontaminanty pocházející z matrice, lze jejich množství stanovit pomocí analýzy blanku sorbentu a tento příspěvek odečíst od hlavního píku při výpočtu
- Před nanesením vzorku lze sorbent ekvilibrovat elučním rozpouštědlem, čímž se potenciální kontaminanty ze sorbentu vyplaví
- Pokud jsou nečistoty zaváděny rozpouštědlem, obvykle problém vyřeší jeho výměna
Problémy s interním standardem
Pokud interní standard nevykazuje 100% výtěžnost, budou následné výpočty nepřesné. Osvědčenou praxí je používat interní standard chemicky podobný analyzované látce, který poskytuje stabilnější referenční bod.
Pokud existuje podezření, že interní standard není z daného SPE sorbentu při použité metodě správně eluován, lze použít externí standard, který se přidá přímo do elučného rozpouštědla a umožní výpočet absolutní výtěžnosti.
Chyby ve výpočtu výtěžnosti
Je důležité postupovat systematicky a určit, kde k chybám dochází:
- Chyby ve výpočtech – zkontrolujte všechny výpočty a zohledněte veškeré ředicí faktory
- Chyby v integraci píků – reintegrujte všechny píky a proveďte manuální kontrolní výpočty
- Chyby analytické metody – ověřte, že použitá analytická metoda umožňuje správnou integraci a výpočty. Zajistěte, aby rozpouštědlo použité při nanášení nebylo příliš silné, a proveďte kalibraci v několika koncentračních úrovních pro ověření linearity. Proveďte systematický troubleshooting metody a identifikujte faktory vedoucí ke špatné reprodukovatelnosti
- Detekce – ujistěte se, že zvolený detektor je vhodný a pracuje správně
Doufáme, že pro vás byl tento tip užitečný. Podívejte se na naše další materiály věnované solid phase extraction (SPE).Těšíme se na vás příště u dalšího praktického tipu!
