Proč je moje výtěžnost vyšší než 100 %?

Při provádění extrakce analytu pomocí SPE obvykle očekáváme 100% výtěžnost (recovery). Pokud je výtěžnost nižší, naznačuje to problém s uvolněním analytu ze sorbentu. Jaké jsou ale důvody, proč může být pozorovaná výtěžnost vyšší, než očekáváme (tj. > 100 %)?

Nejčastější problémy

• Koeluující interference
• Kontaminanty pocházející z rozpouštědla nebo zvoleného sorbentu
• Poškozený nebo nevhodný interní standard, který zkresluje referenční bod
• Chyby ve výpočtu výtěžnosti

Podívejme se na jednotlivé příčiny podrobněji.

Koeluující interference

Tyto látky jsou obvykle přítomny v matrici a cílem SPE kroku je jejich odstranění. Pokud pozorujete výtěžnosti vyšší než 100 %, prvním krokem by měla být kontrola eluátu pomocí ortogonální analytické techniky, která ověří, zda je zvýšená výtěžnost skutečně způsobena koelucí.

Pokud je koeluce potvrzena, existuje několik možných řešení:

1. Upravit promývací kroky SPE metody tak, aby se nečistoty selektivně odstranily během promývání
2. Zvolit alternativní SPE sorbent, který bude tyto interference lépe odstraňovat. To je obzvlášť efektivní, pokud lze analyt nebo interferující látku selektivně ionizovat – iontoměničové sorbenty velmi často poskytují čistší extrakty než reverzní nebo normální fáze
3. Upravit analytickou metodu tak, aby bylo možné oba píky analyticky rozlišit, a tím eliminovat nutnost odstraňovat interferenci již v SPE kroku
4. Analyzovat slepý (blank) vzorek plazmy – tím lze identifikovat přítomné nečistoty a tyto signály následně odečíst při výpočtu výtěžnosti

Kontaminanty z rozpouštědla nebo sorbentu

Tyto nečistoty bývají přítomny ve výchozích materiálech a mají podobné vlastnosti jako sledovaný analyt. V důsledku toho koeluují s analytem během SPE i následného analytického stanovení.

Postup řešení může být následující:

• Použít výše uvedené strategie pro odstranění koeluujících nečistot
• Protože se nejedná o kontaminanty pocházející z matrice, lze jejich množství stanovit pomocí analýzy blanku sorbentu a tento příspěvek odečíst od hlavního píku při výpočtu
• Před nanesením vzorku lze sorbent ekvilibrovat elučním rozpouštědlem, čímž se potenciální kontaminanty ze sorbentu vyplaví
• Pokud jsou nečistoty zaváděny rozpouštědlem, obvykle problém vyřeší jeho výměna

Problémy s interním standardem

Pokud interní standard nevykazuje 100% výtěžnost, budou následné výpočty nepřesné. Osvědčenou praxí je používat interní standard chemicky podobný analyzované látce, který poskytuje stabilnější referenční bod.

Pokud existuje podezření, že interní standard není z daného SPE sorbentu při použité metodě správně eluován, lze použít externí standard, který se přidá přímo do elučného rozpouštědla a umožní výpočet absolutní výtěžnosti.

Chyby ve výpočtu výtěžnosti

Je důležité postupovat systematicky a určit, kde k chybám dochází:

• Chyby ve výpočtech – zkontrolujte všechny výpočty a zohledněte veškeré ředicí faktory
• Chyby v integraci píků – reintegrujte všechny píky a proveďte manuální kontrolní výpočty
• Chyby analytické metody – ověřte, že použitá analytická metoda umožňuje správnou integraci a výpočty. Zajistěte, aby rozpouštědlo použité při nanášení nebylo příliš silné, a proveďte kalibraci v několika koncentračních úrovních pro ověření linearity. Proveďte systematický troubleshooting metody a identifikujte faktory vedoucí ke špatné reprodukovatelnosti
• Detekce – ujistěte se, že zvolený detektor je vhodný a pracuje správně

Doufáme, že pro vás byl tento tip užitečný. Podívejte se na naše další materiály věnované solid phase extraction (SPE).Těšíme se na vás příště u dalšího praktického tipu!