Riziko nesouladu složení mobilní fáze

Je snadné se domnívat, že jakmile je vzorek eluován při extrakci na pevné fázi (SPE), je připraven k nástřiku na analytickou kolonu. Přestože je vzorek po tomto kroku výrazně čistší, ne vždy jeho přímý nástřik do kolony zajistí bezchybnou chromatografii. Nesoulad složení rozpouštědla (solvent mismatch) je známou příčinou deformovaného tvaru píků, proto je nutné věnovat pozornost eluční síle rozpouštědla použitého v kroku SPE.

Při sestavování protokolů pro přípravu vzorků je nutné zohlednit použité eluční rozpouštědlo, celkovou koncentraci vzorku a počáteční složení mobilní fáze metody. Pokud je například vzorek eluován ve 100% organickém rozpouštědle, zatímco separace začíná při vysokém podílu vody (např. 90 %), dochází v systému k nesouladu, který negativně ovlivňuje tvar píků (viz obrázek 1). V ideálním případě by měl být vzorek rozpuštěn v rozpouštědle co nejblíže poměru počáteční mobilní fáze, aby se těmto problémům předešlo.

Je však třeba mít na paměti, že ne všechny poměry elučních rozpouštědel nutně způsobují potíže. Dobrým příkladem vhodného elučního prostředí je použití produktu Phree™ Protein Precipitation pro přípravu vzorků určených k analýze v režimu HILIC (hydrofilní interakční chromatografie). Protokol Phree vyžaduje zředění vzorků v poměru 3 : 1 (acetonitril : voda), což je nezbytné pro úspěšnou precipitaci bílkovin. HILIC začíná při vysokých koncentracích acetonitrilu, ale pro optimální tvar píků je stále nutná přítomnost vody. Vzorky eluované z Phree se proto již nacházejí v ideálním poměru rozpouštědel pro HILIC a nevyžadují další úpravu. Pokud je však cílem analýza pomocí iontově-výměnné chromatografie na kolonách Rezex™, přítomnost acetonitrilu ve vzorku může působit problémy.

Phenomenex: Riziko nesouladu složení mobilní fáze: Vzorek v 50% methanolu.Phenomenex: Riziko nesouladu složení mobilní fáze: Vzorek ve 100% methanolu.