Průvodce řešením problémů v LC/MS - rozlišení, fragmentace, detekce

V dnešním světě analytické chemie je neustálým cílem dosahovat přesných a spolehlivých výsledků. Jedním z klíčových nástrojů, který nám to umožňuje, je kapalinová chromatografie spojená s hmotnostní spektrometrií. Tyto metody umožňují rozdělit a identifikovat složité směsi látek a zkoumat jejich strukturu a vlastnosti.

V naší sérii článků se budeme zabývat technickými a praktickými problémy, které mohou při těchto analýzách vzniknout, a podívame se možná řešení, postupy a doporučení, které je můžou rychle odstranit.

V jednotlivých částech rozebereme následující problémy:

• Žádné píky
• Změny retenčních časů
• Vysoký tlak
• Křížová kontaminace
• Změny MS rozlišení
• Nedostatečná přesnost hmoty (HRAM systémy)
• Nízký tlak
• Změny citlivosti
• Nežádoucí fragmentace

💾 Kompletní příručka v ČJ ke stažení

1. Díl: Průvodce řešením problémů v LC/MS - základní kroky

2. Díl: Průvodce řešením problémů v LC/MS - tlak, kontaminace, retenční časy

Změny citlivosti, Nežádoucí fragmentace, Žádné píky, Nedostatečná přesnost hmoty (HRAM systémy), Změny MS rozlišení

1. Změny citlivosti

MS

• Pokud se snížila plocha všech píků, zkontrolujte, zda přístroj nepotřebuje údržbu ‒ vyčistětě iontový zdroj, případně také iontovou optiku.
• Zkontrolujte, jestli jsou nastavené správné akviziční parametry.
• Zkontrolujte přítomnost aduktů Na+, NH4+, K+. Zvažte použití jiného laboratorního nádobí pro přípravu a skladování mobilní fáze. Připravte novou mobilní fázi
• Zkuste zvýšit koncetraci aditiv nebo pufrů.
• Zkontrolujte nastavení vzdálenosti sprejovací kapiláry od vstupu do vakua hmotnostního spektrometru.
• Ověřte působení matričních efektů. Zvažte použití jiné chromatografické metody a postupu přípravy vzorku.
• Vyměňte sprejovací kapiláru a desolvatační linii.
• Proveďte ladění hmotnostního spektrometru.

Vzorek

• Zkontrolujte, zda-li nedochází k degradaci vzorku. Připravte čerstvý vzorek.
• Zkontrolujte postup přípravy vzorku a koncentraci standardů.
• Do postupu pro přípravu vzorku zahrňte přídavek vnitřního standardu.
• Zvažte jiné ředění vzorku.
• Zkontrolujte objem nástřiku.

Ztráta účinnosti kolony

• Zkontrolujte šířky píků a jejich rozlišení. Nastříkněte mix standardu pro testování účinnosti kolony.
• Vyměňte analytickou kolonu.

Netěsnosti v LC

• Zkontrolujte těsnost spojů v celém systému.

Mobilní fáze

• Zkontrolujte koncentraci aditiv.
• Pokud jste v předchozí analýze použili mobilní fázi obsahující látky snižující účinnost ionizace, vyčistěte iontový zdroj a proveďte proplach LC systému.

Shimadzu: Změny citlivosti, Nežádoucí fragmentace, Žádné píky (LCMS Troubleshooting)

2. Nežádoucí fragmentace

Špatné nastavení iontového zdroje

• Zkontrolujte, zda je nastavená teplota iontového zdroje vhodná pro stanovované analyty.
• Zkontrolujte, zda je ionizační napětí vhodné pro analyty.

Moc vysoká / nízká kolizní energie

• Zkontrolujte a optimalizujte nastavení tlaku kolizního plynu a kolizní energie.

Iontová optika

• Zajistěte správné napětí na desolvatační linii a iontové optice (QArray).

3. Žádné píky

Špatné nastavení MS

• Zkontrolujte, jestli jsou v metodě nastaveny správné podmínky MS měření pro analýzu vašich cílených analytů.
• Nastavte správnou vzdálenost sprejovací kapiláry od vstupu do vakua hmotnostního spektrometru.
• Zkontrolujte nastavení správné výšky sprejovací kapiláry.
• Zkontrolujte, jestli dochází ke sprejování na výstupu z kapiláry.
• Zkontrolujte nastavení teploty iontového zdroje a průtoků plynů.
• Zkontrolujte správné nastavení tlaku kolizního plynu a jeho stabilitu.
• Ověřte, že dochází k eluci analytů v okně měření.
• Zkontrolujte přítomnost aduktů Na+, NH4+, K+.
• Zvažte použití jiného laboratorního nádobí pro přípravu a skladování mobilní fáze. Připravte novou mobilní fázi. Zvažte použití jiné LC metody a postupu přípravy vzorku.
• Koncentrace analytu je pod limited detekce.
• Proveďte ladění hmotnostního spektrometru.

LC

• Zkontrolujte, jestli je kapilára pro vývod eluentu z LC připojena k MS.
• Nedochází k průtoku mobilní fáze. Zkontrolujte, jestli není otevřen odvzdušňovací ventil.
• Proveďte proplach celého systému včetně autosampleru, pro odstranění vzduchových bublin.
• Propláchněte systém isopropanolem pro zajištění správného fungování „check valves“.
• Zkontrolujte, zda nejsou kapiláry zničené nebo skřípnuté.

Nedostatečná nebo naopak moc velká retence analytů

• Zkontrolujte, zda používáte mobilní fázi se správným složením.
• Zkontrolujte, zda používáte správnou kolonu.
• Prodlužte čas analýzy.
• Použijte silnější rozpouštědlo.
• Zkontrolujte, zda je nastaven správný průtok mobilní fáze.

Problémy se vzorkem

• Připravte čerstvý vzorek.
• Zkontrolujte nastavený objem nástřiku v metodě/sekvenci.
• Zkontrolujte, zda je vialka na správné pozici v autosampleru.
• Zamyslete se nad možnou adsorpcí analytů.
• Zkontrolujte, zda nejsou přítomny vzduchové bubliny na dně vialky.

Eluent je veden do odpadu

• Zkontrolujte nastavení přepínacího ventilu (pokud je součástí systému).

Shimadzu: Nedostatečná přesnost hmoty (HRAM systémy), Změny MS rozlišení (LCMS Troubleshooting)

4. Nedostatečná přesnost hmoty (HRAM systémy)

Rozladěný MS

• Proveďte a zkontrolujte naladění systému.

Kalibrace TOF analyzátoru

• Proveďte kalibraci TOF analyzátoru.

Nesprávná kalibrace

• Zkontrolujte, zda jsou analyty v kalibračním rozsahu a případně upravte faktor ředění.

Saturace detektoru

• Nařeďte vzorky nebo snižte objem nástřiku.

5. Změny MS rozlišení

Rozladěný MS

• Proveďte a zkontrolujte naladění systému.