Purifikace oligonukleotidů pomocí semipreparativní kapalinové chromatografie s reverzní fází

Podívejte se na bezproblémovou integraci systému Vanquish Analytical Purification LC do workflow přečištování a analýzy oligonukleotidů.

Hlavní benefity aplikace

• Začlenění platformy Thermo Scientific Vanquish LC do výrobního workflow přední farmaceutické společnosti v oboru, Eurofins Genomics Europe Pharma and Diagnostic Products & Services Synthesis GmbH, Ebersberg, Německo, k purifikaci oligonukleotidů definovaných zákazníkem na reverzní fázi.

• Zdůraznění flexibility UHPLC a HPLC systémů Thermo Scientific Vanquish, které mohou pracovat nejen za analytických podmínek UHPLC, ale pokrývají také aplikace semipreparativní LC purifikace pomocí integrovaného sběrače frakcí Thermo Scientific Vanquish Fraction Collector.

• Vysoce přesná izolace cílových syntetických produktů pomocí Thermo Scientific Vanquish Analytical Purification LC system.

Pragolab: Thermo Scientific Vanquish analytické purifikační LC systémy

V posledních několika letech vzrostl zájem o oligonukleotidy v oblasti biochemického výzkumu a diagnostiky a jako o léčiva, proto bylo vynaloženo velké úsilí na optimalizaci a automatizaci jejich syntézy.

Syntéza oligonukleotidů zahrnuje velké množství jednotlivých reakcí, což nevyhnutelně vede k akumulaci nečistot, jako jsou zkrácené sekvence. Proto je purifikace požadovaných oligonukleotidů klíčovým krokem.

💡 Článek: Analytické purifikační LC systémy Vanquish

Od 70. let 20. století se k analýze a čištění syntetických oligonukleotidů používá několik chromatografických přístupů. V posledních letech došlo k významnému vývoji z hlediska výkonu přístrojů a stacionární fáze. Pokud je požadována vysoká čistota produktů, padá volba na metodu HPLC. Mezi separační techniky běžně používané pro separaci nukleových kyselin patří RP-HPLC (reverzní fáze-HPLC).

Pragolab: Analytické purifikační LC systémy Vanquish

Rostoucí význam oligonukleotidů jako terapeutických látek zvyšuje úroveň kontroly kvality. V těchto protokolech je vyžadována chromatografická analýza API (active pharmaceutical ingredients), aby byla zajištěna detekce kontaminantů na úrovni koncentrace až do stopových množství ve vztahu k léčivu.

Tato práce demonstruje purifikaci oligonukleotudů pomocí semipreparativní kapalinové chromatografie na reverzní fázi.

Cílem je:

• rozlišit vedlejší produkty syntézy DNA
• izolovat a zachytit cílové oligonukleotidy
• určit účinnost purifikace prostřednictvím zpětné analýzy shromážděných frakcí

To vše na LC systému Vanquish Analytical Purification, což usnadňuje integrovaný Vanquish Fraction Collector.

Konfigurace systému Vanquish Flex Analytical Purification LC:

• Vanquish System Base Horizon/Flex (P/N VF-S01-A)
• Vanquish Binary Pump F (P/N VF-P10-A-01)
• Vanquish Split Sampler FT (P/N VF-A10-A)
• 1000 μL sample loop (P/N 6850.1980)
• Vanquish Column Compartment H with active pre-heater (P/N VH-C10-A-02)
• Vanquish Diode Array Detector FG (P/N VF-D11-A-01)
• Semi-Micro Biocompatible Flow Cell (P/N 6083.0550)
• Integral Vanquish Fraction Collector (P/N VF-F20-A-01)
• Delay capillary for peak-based fractionation, 0.25 × 1500 mm, MP35N, Viper (P/N 6706.1110)
• Needle capillary, 0.18 × 415 mm, partially PEEK-shielded MP35N, Viper (P/N 6706.1010)
• Flush buffer loop, 50 μL, PEEK, Viper (P/N 6706.1070)

Pragolab: Vzorek oligonukleotidu AT647-BHQ2. (A) Přehled frakcionace. (B) Re-analýza všech odebraných frakcí. (C) Potvrzení, že píky nečistot v černé záznamu jsou zamýšlenou purifikací eliminovány.

Veškeré podrobnosti naleznete v přiložené aplikaci, nebo nás neváhejte kontaktovat na [email protected].

Přehled nejnovější literatury Thermo Fisher Scientific z oblasti analýzy oligonukleotidů v knihovně LabRulezLCMS

• ASMS: Streamlining workflow from characterization to monitoring of therapeutic oligonucleotides impurities across IPRP-LC-HRAM-MS platforms (Postery | 2022)

• Comprehensive oligonucleotide analysis (Ostatní | 2022)

• High-throughput analysis of oligonucleotides using a single quadrupole mass spectrometer for quality control (Aplikace | 2022)

• ISC: High-throughput analysis of oligonucleotides using a single quadrupole mass spectrometer for quality control (Postery | 2022)

• HPLC: High-throughput analysis of oligonucleotides using a single quadrupole mass spectrometer for quality control (Postery
  | 2022)

• Characterization of mRNA 5’ capping products using an LC-HRAM-MS/MS analytical platform and Thermo Scientific BioPharma Finder software solution (Aplikace | 2022)

• mRNA direct sequence mapping using automated partial digestion with magnetic nuclease and LC-HRMS (Aplikace | 2022)

• ASMS: Characterization of mRNA vaccine 5’ and 3’ end products using BioPharma Finder 5.0 (Postery | 2022)

• ISC: Oligonucleotide sequencing by LC-MS/MS (Prezentace | 2022)

• Characterization of in vitro-transcribed (IVT) mRNA poly(A) tail by LC-HRAM-MS and BioPharma Finder 5.0 software (Aplikace | 2022)

• BioLC columns and accessories (Chromatography consumables catalog) (Brožury a specifikace | 2022)

• ISC: Ensuring precise isolation of macromolecules by hyphenating UHPLC separation power with exact fractionation for analytical and semi-preparative LC purification (Postery | 2022)

• Characterization of lipid nanoparticle (LNP) composition using UHPLC-CAD (Aplikace | 2022)

• BioPharma workflow solutions (Brožury a specifikace | 2022)

• ISC: 1D/2D-UHPLC-MS System and its use in the Field of Drug Metabolism and Pharmacokinetics (Postery | 2022)

• Metabolomics: Differentiating sugar phosphate isomers using high resolution mass spectrometry coupled with MSn, collision induced dissociation, and ultraviolet photodissociation (Postery | 2022)

• ASMS: Differentiating Isomers using High Resolution Mass Spectrometry Coupled with MSn, Collision Induced Dissociation, and Ultraviolet Photodissociation (Postery | 2022)

• Low-flow columns and accessories (Ostatní | 2022)