Simultánní stanovení vitaminu D₂ a D₃ v mléce

Út, 25.5.2021
| Originální článek z: HPST/Agilent 6470
Kvantitativní analýza v reálné matrici pomocí Agilent 1290 Infinity II LC ve spojení s tandemovým hmotnostním spektrometrem Agilent 6470 LC/TQ.
Video placeholder
  • Foto: Pixabay/Imo Flow: Simultánní stanovení vitaminu D₂ a D₃ v mléce
  • Video: Agilent Technologies: Take a Closer Look at the New 6470B Triple Quadrupole LC/MS

Vitamin D hraje důležitou roli v metabolických cestách, včetně homeostázy vápníku a fosforu, a je prekurzorem steroidních hormonů. Bohatým zdrojem vitaminu D jsou játra, ryby, vejce nebo mléčné výrobky. V některých rozvojových zemích jsou mléko a oleje na vaření, jako nákladově efektivní řešení prevence podvýživy, o vitamin D obohacovány. V rostlinách se nachází jako ergokalciferol (vitamin D₂) a u zvířat jako cholekalciferol (vitamin D₃).

Kvantitativní analýza založená na LC/MS/MS je pro kvantifikaci populárnější než tradiční analytické metody a to kvůli lepší specificitě a vyšší citlivosti. Analýza D₂ a D₃ v krmných směsích pro zvířata, potravinách rostlinného původu nebo potravinách o vitamin D obohacovaných uměle však čelí výzvám, jako je rychlá degradace a špatná reprodukovatelnost. Složitost analýzy se dále zvýšuje v důsledku rozmanitosti mléka a významným matricovžm efektům. Vyvinutá LC/QQQ metodika prokázala citlivost na úrovni 0,4 ng/g, má vysokou reprodukovatelnost a je vhodná nejen pro rutinní laboratoře, které tyto testy provádějí.

Struktura vitaminu D₂ a D₃

Úvod

Pro analýzu vitaminů D₂ a D₃ existuje řada publikovaných metod. Vzorky potravin s významnými matričními efekty se v LC/MS/MS analyzují pomocí APCI iontového zdroje. Přes veškeré úsilí ale představuje rozmanitost vzorků mléka s různým obsahem tuku pro analytická data potenciální hrozbu. Zmýdelnění ethanolickým hydroxidem draselným je důležité při manipulaci s proměnlivým poměrem tuků, zatímco přidání pyrogallolu je zásadní, aby se zabránilo oxidaci analytů během opakovaných kroků promývání. Derivatizace pomocí 4-fenyl-1,2,4-triazolin-3,5-dionu (PTAD) je užitečná ke zvýšení citlivosti obou analytů, zatímco pro analýzu výtěžnosti je zásadní použití deuterovaných vnitřních standardů (IS).

Ředicí protokol pro přípravu standardů

Instrumentace

Parametry HPLC metody
  • Kolona: Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 (p/n 699975-302)
  • Teplota kolony: 10 °C
  • Objem nástřiku: 10 μL
  • Teplota autosampleru: 10 °C
  • Proplachovací roztok: Metanol/Voda (80/20)
  • Mobilní fáze: A) 0,1% kyseliny mravenčí ve vodě; B) 100% methanol
  • Průtok: 300 μL/min
Parametry LC/TQ systému
  • Ionizační mód: AJS (+ ve)
  • Nebulizační plyn: 45 psi
  • Sušící plyn: 5 l/min při 300 °C
  • Vyhřívací plyn: 11 l/min při 250 °C
  • Napětí na kapiláře: 3500 V
  • Napětí trysky: 500 V
  • CAV: 5 V
  • Dwell time: 50 ms
  • Rozlišení: Unit/Unit

Parametry MRM pro analýzu vitaminu D₂ a D₃

Výsledky a diskuse

Vyvinutá metoda je vhodná pro kvantifikaci dvou forem vitaminu D: ergokalciferolu a cholekalciferolu. Bylo zjištěno, že metoda ESI-LC/MS/MS založená na MRM je specifická pro dva analyty v mléčné matrici. Kromě použití interních standardů se při sledování nízkých mezí detekce, vysoké citlivosti a vysoké výtěžnosti ukázala být užitečná příprava vzorků založená na zmýdelnění mléčné matrice s následnou derivatizací.

Příprava vzorků napříč různými typy mléka z trhu ukázala slušnou výtěžnost obou analytů. Tuto metodu mohou tedy použít výzkumné, kontrolní nebo komerční zkušební laboratoře pro kvantitativní odhad obsahu vitaminů D2 a D3 při obohacování potravit.

Citlivost analýzy vitamínů D₂ a D₃ (0,4 ppb v matrici oproti blanku)

Překrytí různých koncentrací vitamínů D₂ a D₃

HPST
 

Mohlo by Vás zajímat

Průvodce řešením problémů v kapalinové chromatografii - Shimadzu HPLC Troubleshooting

Příručky
| 2021 | Shimadzu
Instrumentace
HPLC
Výrobce
Shimadzu
Zaměření
---

Waters Atlantis Premier BEH Z-HILIC Columns

Brožury a specifikace
| 2021 | Waters
Instrumentace
Spotřební materiál, LC kolony
Výrobce
Waters
Zaměření
---

Simultaneous Quantification of Multiclass PFAS in Biosolids Using a Single Extraction Method and the Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS

Aplikace
| 2021 | Agilent Technologies
Instrumentace
LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
Výrobce
Agilent Technologies
Zaměření
Životní prostředí

Quantitative Determination of NDMA Impurity in Ranitidine Drug Products – Examples of Actual Samples Analysis by LCMS-8060 with APCI

Aplikace
| 2021 | Shimadzu
Instrumentace
LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
Výrobce
Shimadzu
Zaměření
Farmaceutická analýza

It’s Not All About the Column: The Role of the Mobile Phase and Your Instrument

Prezentace
| 2021 | Agilent Technologies
Instrumentace
Spotřební materiál, HPLC
Výrobce
Agilent Technologies
Zaměření
---
 

Podobné články

Nejbližší akce | Článek

VITATOX 2020 - den 2

V dnešních dnech probíhá ve Dvoře Králové tradiční vědecká konference VITATOX. Druhý den konference je za námi a viděli celkově 8 zajímavých přednášek. Podívejte se na přednášky z druhého dne.
Vědecký článek | Zdraví

Adaptace metody RECIPE® 25-OH-VITAMIN D2/D3 in plasma and serum – ON LINE analysis pro vzorky suché krevní skvrny (DBS)

Stanovení 25-hydroxy-vitaminů D₂/D₃ v plasmě či séru pomocí robustní a spolehlivé metody DBS, která je pro pacienta atraktivní s ohledem na korespondenční formu méně invazivního odběru vzorků.
Článek | Aplikace

Simultánní screening a kvantifikace reziduí pesticidů v červeném zelí

Tato aplikační poznámka přináší UHPLC-Q-TOF/MS metodu k současnému kvalitativnímu screeningu a kvantitativnímu stanovení 415 reziduí pesticidů v červeném zelí.
Článek | Aplikace

Analýza anorganických aniontů pomocí HILIC chromatografie a Agilent LC/MSD iQ detektoru

Tato aplikace popisuje analýzu anorganických aniontů pomocí hydrofilní interakční chromatografie (HILIC) ve spojení s hmotnostním detektorem Agilent InfinityLab LC/MSD iQ.
 

Mohlo by Vás zajímat

Průvodce řešením problémů v kapalinové chromatografii - Shimadzu HPLC Troubleshooting

Příručky
| 2021 | Shimadzu
Instrumentace
HPLC
Výrobce
Shimadzu
Zaměření
---

Waters Atlantis Premier BEH Z-HILIC Columns

Brožury a specifikace
| 2021 | Waters
Instrumentace
Spotřební materiál, LC kolony
Výrobce
Waters
Zaměření
---

Simultaneous Quantification of Multiclass PFAS in Biosolids Using a Single Extraction Method and the Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS

Aplikace
| 2021 | Agilent Technologies
Instrumentace
LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
Výrobce
Agilent Technologies
Zaměření
Životní prostředí

Quantitative Determination of NDMA Impurity in Ranitidine Drug Products – Examples of Actual Samples Analysis by LCMS-8060 with APCI

Aplikace
| 2021 | Shimadzu
Instrumentace
LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
Výrobce
Shimadzu
Zaměření
Farmaceutická analýza

It’s Not All About the Column: The Role of the Mobile Phase and Your Instrument

Prezentace
| 2021 | Agilent Technologies
Instrumentace
Spotřební materiál, HPLC
Výrobce
Agilent Technologies
Zaměření
---
 

Podobné články

Nejbližší akce | Článek

VITATOX 2020 - den 2

V dnešních dnech probíhá ve Dvoře Králové tradiční vědecká konference VITATOX. Druhý den konference je za námi a viděli celkově 8 zajímavých přednášek. Podívejte se na přednášky z druhého dne.
Vědecký článek | Zdraví

Adaptace metody RECIPE® 25-OH-VITAMIN D2/D3 in plasma and serum – ON LINE analysis pro vzorky suché krevní skvrny (DBS)

Stanovení 25-hydroxy-vitaminů D₂/D₃ v plasmě či séru pomocí robustní a spolehlivé metody DBS, která je pro pacienta atraktivní s ohledem na korespondenční formu méně invazivního odběru vzorků.
Článek | Aplikace

Simultánní screening a kvantifikace reziduí pesticidů v červeném zelí

Tato aplikační poznámka přináší UHPLC-Q-TOF/MS metodu k současnému kvalitativnímu screeningu a kvantitativnímu stanovení 415 reziduí pesticidů v červeném zelí.
Článek | Aplikace

Analýza anorganických aniontů pomocí HILIC chromatografie a Agilent LC/MSD iQ detektoru

Tato aplikace popisuje analýzu anorganických aniontů pomocí hydrofilní interakční chromatografie (HILIC) ve spojení s hmotnostním detektorem Agilent InfinityLab LC/MSD iQ.
 

Mohlo by Vás zajímat

Průvodce řešením problémů v kapalinové chromatografii - Shimadzu HPLC Troubleshooting

Příručky
| 2021 | Shimadzu
Instrumentace
HPLC
Výrobce
Shimadzu
Zaměření
---

Waters Atlantis Premier BEH Z-HILIC Columns

Brožury a specifikace
| 2021 | Waters
Instrumentace
Spotřební materiál, LC kolony
Výrobce
Waters
Zaměření
---

Simultaneous Quantification of Multiclass PFAS in Biosolids Using a Single Extraction Method and the Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS

Aplikace
| 2021 | Agilent Technologies
Instrumentace
LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
Výrobce
Agilent Technologies
Zaměření
Životní prostředí

Quantitative Determination of NDMA Impurity in Ranitidine Drug Products – Examples of Actual Samples Analysis by LCMS-8060 with APCI

Aplikace
| 2021 | Shimadzu
Instrumentace
LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
Výrobce
Shimadzu
Zaměření
Farmaceutická analýza

It’s Not All About the Column: The Role of the Mobile Phase and Your Instrument

Prezentace
| 2021 | Agilent Technologies
Instrumentace
Spotřební materiál, HPLC
Výrobce
Agilent Technologies
Zaměření
---
 

Podobné články

Nejbližší akce | Článek

VITATOX 2020 - den 2

V dnešních dnech probíhá ve Dvoře Králové tradiční vědecká konference VITATOX. Druhý den konference je za námi a viděli celkově 8 zajímavých přednášek. Podívejte se na přednášky z druhého dne.
Vědecký článek | Zdraví

Adaptace metody RECIPE® 25-OH-VITAMIN D2/D3 in plasma and serum – ON LINE analysis pro vzorky suché krevní skvrny (DBS)

Stanovení 25-hydroxy-vitaminů D₂/D₃ v plasmě či séru pomocí robustní a spolehlivé metody DBS, která je pro pacienta atraktivní s ohledem na korespondenční formu méně invazivního odběru vzorků.
Článek | Aplikace

Simultánní screening a kvantifikace reziduí pesticidů v červeném zelí

Tato aplikační poznámka přináší UHPLC-Q-TOF/MS metodu k současnému kvalitativnímu screeningu a kvantitativnímu stanovení 415 reziduí pesticidů v červeném zelí.
Článek | Aplikace

Analýza anorganických aniontů pomocí HILIC chromatografie a Agilent LC/MSD iQ detektoru

Tato aplikace popisuje analýzu anorganických aniontů pomocí hydrofilní interakční chromatografie (HILIC) ve spojení s hmotnostním detektorem Agilent InfinityLab LC/MSD iQ.
 

Mohlo by Vás zajímat

Průvodce řešením problémů v kapalinové chromatografii - Shimadzu HPLC Troubleshooting

Příručky
| 2021 | Shimadzu
Instrumentace
HPLC
Výrobce
Shimadzu
Zaměření
---

Waters Atlantis Premier BEH Z-HILIC Columns

Brožury a specifikace
| 2021 | Waters
Instrumentace
Spotřební materiál, LC kolony
Výrobce
Waters
Zaměření
---

Simultaneous Quantification of Multiclass PFAS in Biosolids Using a Single Extraction Method and the Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS

Aplikace
| 2021 | Agilent Technologies
Instrumentace
LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
Výrobce
Agilent Technologies
Zaměření
Životní prostředí

Quantitative Determination of NDMA Impurity in Ranitidine Drug Products – Examples of Actual Samples Analysis by LCMS-8060 with APCI

Aplikace
| 2021 | Shimadzu
Instrumentace
LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
Výrobce
Shimadzu
Zaměření
Farmaceutická analýza

It’s Not All About the Column: The Role of the Mobile Phase and Your Instrument

Prezentace
| 2021 | Agilent Technologies
Instrumentace
Spotřební materiál, HPLC
Výrobce
Agilent Technologies
Zaměření
---
 

Podobné články

Nejbližší akce | Článek

VITATOX 2020 - den 2

V dnešních dnech probíhá ve Dvoře Králové tradiční vědecká konference VITATOX. Druhý den konference je za námi a viděli celkově 8 zajímavých přednášek. Podívejte se na přednášky z druhého dne.
Vědecký článek | Zdraví

Adaptace metody RECIPE® 25-OH-VITAMIN D2/D3 in plasma and serum – ON LINE analysis pro vzorky suché krevní skvrny (DBS)

Stanovení 25-hydroxy-vitaminů D₂/D₃ v plasmě či séru pomocí robustní a spolehlivé metody DBS, která je pro pacienta atraktivní s ohledem na korespondenční formu méně invazivního odběru vzorků.
Článek | Aplikace

Simultánní screening a kvantifikace reziduí pesticidů v červeném zelí

Tato aplikační poznámka přináší UHPLC-Q-TOF/MS metodu k současnému kvalitativnímu screeningu a kvantitativnímu stanovení 415 reziduí pesticidů v červeném zelí.
Článek | Aplikace

Analýza anorganických aniontů pomocí HILIC chromatografie a Agilent LC/MSD iQ detektoru

Tato aplikace popisuje analýzu anorganických aniontů pomocí hydrofilní interakční chromatografie (HILIC) ve spojení s hmotnostním detektorem Agilent InfinityLab LC/MSD iQ.
Další projekty
Sledujte nás
Další informace
WebinářeO násKontaktujte násPodmínky užití

LabRulez s.r.o. Všechna práva vyhrazena.