Analýza množství a čistoty lidského růstového hormonu a analýza dimerů a proteinů s vyšší molekulovou hmotností

Analýza je určena k identifikaci a stanovení množství a čistoty lidského růstového hormonu HGH 191 AA. Součástí testu je také samostatné stanovení obsahu dimeru a proteinů s vyšší molekulovou hmotností, které představují důležité parametry kvality přípravků obsahujících růstový hormon.

Lidský růstový hormon HGH 191 AA

Lidský růstový hormon, označovaný také jako HGH, somatropin nebo rekombinantní lidský růstový hormon (rHGH), je peptidový hormon tvořený 191 aminokyselinami. Přirozeně se podílí na regulaci růstu, metabolismu a dalších fyziologických procesů.

Somatropin používaný ve farmaceutických přípravcích je rekombinantně vyráběná forma odpovídající lidskému růstovému hormonu se 191 aminokyselinami. Kvalitu těchto přípravků ovlivňuje nejen množství a čistota HGH, ale také přítomnost dimerů a dalších proteinových forem s vyšší molekulovou hmotností.

Dimer vzniká spojením dvou molekul růstového hormonu. Protože je stále tvořen molekulami HGH, nemusí být při běžném stanovení čistoty vyhodnocen jako standardní nečistota. Pro jeho přesné stanovení je proto nutná samostatná analýza. Vyšší obsah dimeru a dalších vysokomolekulárních proteinových forem může ovlivňovat kvalitu, účinnost a snášenlivost produktu.

Co analýza stanovuje

• Identitu HGH 191 AA
• Množství HGH ve vzorku
• Čistotu růstového hormonu
• Obsah dimeru
• Obsah proteinů s vyšší molekulovou hmotností
• Výsledky v jednotkách odpovídajících typu analyzovaného vzorku

Parametry analýzy

• Cílová látka: lidský růstový hormon HGH 191 AA
• Další názvy: somatropin, HGH, rHGH, 191 AA
• Molekulová hmotnost: 22 124 Da
• Analytická metoda: HPLC
• Mez detekce HGH: 0,2 mg/ml nebo 0,5 mg/lahvičku
• Mez detekce dimeru a proteinů s vyšší molekulovou hmotností: 0,008 %
• Výsledný formát pro lyofilizovaný vzorek: mg/lahvičku, IU, čistota v % a obsah dimeru v %
• Výsledný formát pro kapalný vzorek: mg/ml, IU, čistota v % a obsah dimeru v %
• Alternativní výsledný formát: čistota m/m, čistota GH a obsah dimeru v %
• Minimální množství lyofilizovaného vzorku: 1 celá neotevřená lahvička s lyofilizátem
• Minimální množství kapalného vzorku: 1 ml
• Minimální množství API ve formě prášku: 30 mg v uzavřené skleněné lahvičce, která chrání vzorek před absorpcí vlhkosti
• Průměrná doba zpracování: 7 pracovních dnů

Důležité upozornění

Analýza rozpoznává jako lidský růstový hormon pouze HGH se sekvencí 191 aminokyselin. HGH 192 AA není cílovou látkou této metody a jeho přítomnost by vedla k výsledku „HGH nezjištěn“.

Alternativní výsledný formát založený na čistotě m/m je určen pouze pro surové API ve formě prášku. U lyofilizovaných přípravků se standardně uvádí množství v mg/lahvičku a u kapalných vzorků v mg/ml.

Doplňkové analýzy

• Analýza TFA: Detekce a stanovení množství kyseliny trifluoroctové (TFA) ve vzorku. Výsledek je uváděn v mg/lahvičku.
• Kompletní nezpracovaná data: Poskytnutí dostupných nezpracovaných analytických dat z hlavního testu i objednaných doplňkových analýz, pokud jsou pro danou metodu k dispozici.
• Analýza přítomnosti fentanylu
• Alternativní výsledný formát – čistota m/m: Alternativní vyjádření výsledku jako hmotnostní čistota m/m. Tato možnost je určena výhradně pro surové API ve formě prášku.
• Test variability včetně stanovení dimeru: Analýza více lahviček ze stejné šarže za účelem posouzení variability množství HGH, čistoty a obsahu dimeru. Dimer je stanoven ve všech dodaných lahvičkách.
• Test variability: Analýza více kusů vzorku ze stejné šarže za účelem ověření variability mezi jednotlivými lahvičkami nebo baleními. U této varianty se dimer v dodatečných vzorcích nestanovuje.
• Měření pH
• Analýza endotoxinů: Stanovení přítomnosti bakteriálních endotoxinů, zejména lipopolysacharidů (LPS). Test je určen pouze pro hotové produkty a není vhodný pro surové prášky.
  • Standardní metoda poskytuje přesné výsledky do 10 EU/lahvičku. Vyšší hodnoty jsou odhadované a pro jejich přesné stanovení je nutné další měření s upraveným ředěním. Pro tento případ se doporučuje zaslat dvě lahvičky. Při očekávané hodnotě nad 10 EU/lahvičku lze analýzu předem přizpůsobit vyššímu rozsahu.
• CHNS Mass Report: Elementární analýza poskytující přesné stanovení obsahu dusíku a síry. Výsledky lze využít ke stanovení čistého obsahu peptidu, označovaného jako Net Peptide Content (NPC).
• Dodatečný protokol: Vystavení samostatného dodatečného protokolu s jiným jménem klienta.
• LC-MS screening peptidové kontaminace: LC-MS screening zaměřený na přítomnost jiných peptidů nebo degradačních produktů ve vzorku. Screening je omezen na peptidy zahrnuté v databázi dostupných analýz.
  • Základní výsledek poskytuje identifikaci kontaminujícího peptidu. Pokud je kontaminace zjištěna, lze následně objednat také stanovení jejího množství.
• Testování sterility: Testy TAMC a TYMC kontrolují přítomnost bakterií, kvasinek a plísní v produktu. Pro analýzu je nutné zaslat další neotevřené kusy vzorku. Průměrná doba zpracování této analýzy je 14 dnů.
• Analýza těžkých kovů