Development of a SPE LC-MS/MS Method Utilizing QuanRecovery Sample Plates with MaxPeak High Performance Surfaces for the Bioanalytical Quantification of Pramlintide from Serum

Význam tématu

Bioanalýza pramlintidu je důležitá pro sledování účinků u pacientu s diabetem a pro výzkum role amylinu v dalších onemocněních. Nízké hladiny, rychlá eliminace a tendence k nespecifickému vázání peptidu kladou vysoké nároky na citlivost a spolehlivost analytické metody.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout robustní SPE LC MS MS metodu s využitím QuanRecovery sample plates s MaxPeak High Performance Surfaces pro kvantifikaci pramlintidu z lidského a potkaniho séra. Metoda má zajistit vysoké procento obnovy, nízké limity detekce a minimalizovat matriční efekty.

Použitá metodika

Metoda kombinuje SPE s Oasis WCX µElution platy, eluční protokol s trifluoroctovou kyselinou v acetonitrilu vodě, chromatografii na ACQUITY UPLC Peptide CSH C18 2.1×50 mm 1.7 µm, optimalizovaný gradient 22–27 % organiky během 3 minut a detekci na Xevo TQ XS MS v režimu MRM.

Použitá instrumentace

• Oasis WCX µElution SPE 96 well plate
• QuanRecovery sample plates s MaxPeak High Performance Surfaces
• ACQUITY UPLC I Class PLUS System
• ACQUITY UPLC Peptide CSH C18 2.1×50 mm 1.7 µm
• Xevo TQ XS tandemový kvadrupólový MS ESI+
• MassLynx v4.2 a TargetLynx XS software

Hlavní výsledky a diskuse

• Optimalizované SPE na Oasis WCX zvýšilo obnovu pramlintidu z 58 na ~75 %.
• QuanRecovery plates významně snížily nespecifické vázání, dosahující ~99 % obnovy oproti ~3 % v polypropylenu.
• Optimalizovaný chromatografický gradient snížil matriční potlačení z ~20 % na <10 %.
• MRM prekurzor 988.36 m/z a fragment 968.11 m/z poskytly vysokou citlivost a selektivitu.
• LLOQ 25 pg/mL při 100 µL vzorku, linearita 25–50000 pg/mL r2 >0.99, CV <5 %.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a reprodukovatelná extrakce peptidu do 2 hodin.
• Vysoká citlivost pro farmakokinetické studie a monitorování dávkování.
• Možnost aplikace na kvantifikaci dalších hydrofobních peptidů v komplexních matricích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Bioanalytická metoda s vysoce výkonnými povrchy vzorkovacích destiček se uplatní i v dalších oblastech, například v Alzheimerově výzkumu a studiu amylinových agonistů. Pokročilé sorbenty a povrchově upravené labware dále minimalizují ztráty a rozšiřují detekční rozsah.

Závěr

Navržená SPE LC MS MS metoda kombinuje optimalizované SPE protokoly, QuanRecovery povrchy a vysoce selektivní chromatografii, čímž dosahuje vysoké obnovy, minimálního nespecifického vázání, nízkých limitů detekce a vynikající reprodukovatelnosti při kvantifikaci pramlintidu v séru.

Reference

1. Center for Drug Evaluation and Research Approval Package for Application Number 21 332 Clinical Pharmacology and Biopharmaceutics Review
2. SYMLIN Product Information retrieved from drugs com availability generic symlin html
3. Mohamed LA Zhu H Mousa YM Wang E Qiu WQ Kaddoumi A Amylin Enhances Amyloid β Peptide Brain to Blood Efflux Across the Blood Brain Barrier J Alzheimers Dis 2017 56 3 1087 1099
4. Rabe M Verdes D Seeger S Understanding Protein Adsorption Phenomena at Solid Surfaces Adv Colloid Interface Sci 2011 162 1 2 87 106